鸭梨α-法尼烯合成酶基因双链RNAi表达载体的构建

目的：为了在转基因鸭梨植株中有效抑制转录后α-法尼烯合成酶基因（PFS）的表达,研究了α-法尼烯合成酶基因双链RNAi载体的构建。方法：利用RT—PCR技术,从鸭梨的果皮中获得了来源于PFS编码区的2个基因片段,反向连接,构建成RNAi载体。结果：经PCR扩增、限制性内切酶消化和序列测定验证,所构建的载体其序列与设计相一致。结论：克隆质粒pMD-L-S构建成功,为借助农杆菌介导法将PFS基因转化到鸭梨再生植株中奠定了基础。     

采后鸭梨果肉和果心中氧化酶活性与过氧化物含量的变化（简报）

采后的鸭梨果实果心的抗坏血酸氧化酶活性和过氧化物含量高于果肉,而过氧化氢酶活性则显著低于果肉,多酚氧化酶活性差别不大。随着采后天数的延长,果实的过氧化物含量呈下降趋势。     

鸭梨多酚氧化酶基因反义表达载体的构建及农杆菌介导的遗传转化

根据鸭梨多酚氧化酶基因序列设计引物,PCR扩增该基因3′端450bp的片段,并将该片段反向插入真核表达载体pB I121的CaMV 35S启动子和NOS终止子之间,首次构建了鸭梨PPO基因的反义表达载体;其后,在农杆菌EHA105的介导下,成功实现了PPO反义基因对鸭梨组培苗的遗传转化。经Northern杂交和酶活检测证实,转基因鸭梨植株体内的多酚氧化酶基因转录和翻译水平均得到明显抑制,从而为耐褐化梨新品种的培育奠定了基础。     

鸭梨PPO与GFP融合基因的烟草转化及亚细胞定位观察

将鸭梨PPO基因与绿色萤光蛋白GFP基因相融合共同进行遗传转化的方式,对鸭梨多酚氧化酶开展细胞定位研究。通过克隆该酶基因除终止密码子TAA外长度为1 779bp的CDS序列,与绿色荧光蛋白基因重组构建了荧光表达载体pBI121-PPO-GFP,借助农杆菌转化烟草,转基因烟草叶片细胞经激光扫描共聚焦显微镜观察,绿色荧光蛋白荧光与叶绿体自发荧光相重合。结果表明鸭梨多酚氧化酶为叶绿体蛋白质。     

‘鸭梨’果心多酚氧化酶提取方法的优化

以‘鸭梨’为供试材料,通过设定不同实验条件,分析影响果心多酚氧化酶（polyphenoloxidase,PPO）提取效率的部分因素,以期找到提取‘鸭梨’果心多酚氧化酶的最适条件。结果表明：磷酸盐提取缓冲液的pH≥7．0,提取缓冲液中分别含有0．2％TritonX-100、1％SDS、6％-8％PVP、2％PVPP以及每克果心鲜样中加入2mg抗坏血酸时均能高效提取‘鸭梨’果心PP0。     

雪花梨和鸭梨果实贮藏特性比较（简报）

采后雪花梨和鸭梨果实于20±1℃下均具典型的呼吸跃变过程。后者采后初期对低温敏感,降温过快,导致早期黑心病.12C 下,一周后每 3d降1C 缓慢降温,直至0±0.5C 可控制早期黑心病的发生。前者直接于0C下贮藏效果好。后者对CO_2也敏感,尤其是果心组织,5％～10％的CO_2处理两周,即可导致严重的果心组织褐变,但小于10％的CO_2对前者较安全,且能获得较好的贮藏品质。     

鸭梨及其变异类型的RAPD分析

鸭梨为梨属白梨系统优良资源,生产中其变异类型较多。本文首次对鸭梨及其9个鸭梨变异类型进行RAPD分析,并初步筛选出3个多态性引物即S28、S32、S176。研究发现:芽变品种垂枝鸭梨增加了1条特异带(S32-600)。在芽变品种魏县巨鸭梨、甜鸭梨、垂枝鸭梨的扩增产物中均少1条特异带(S28-400)。魏县巨鸭梨扩增产物中缺少2条特异性条带(S176-900和S176-1150)和阎庄自花结实鸭梨缺少1条特异性条带(S176-1150)。可见魏县巨鸭梨、甜鸭梨、垂枝鸭梨与阎庄自花与其他类型能区分开。     

Morphological and molecular characterization of Alternaria isolates on fruits of Pyrus bretschneideri Rehd. ＂Ya Li＂

A total of 123 Alternaria isolates were obtained from roting fruits of Pyrus bretschneideri ＂Ya Li＂ collected in Hebei Province, China. The isolates, according to morphological characteristics of conidia and sporulation patterns, were segregated into four groups： A. alternata group, A. tenuissima group, A. yaliinficiens group and Alternaria sp. group. Molecular characteristics of part of the isolates were determined using random amplified polymorphism DNA （RAPD） analysis. Based on cluster analysis of RAPD data, large- and small-spored Alternaria spp. were evidently distinguished, and the small-spored species can form five clusters that fundamentally paralleled the morphological groupings.     

梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其序列分析

利用RT-PCR技术从鸭梨的果皮中获得了一个全长为1824bp的α-法尼烯合成酶基因(α-Farnesene Synthase,PFS)克隆,该cDNA包含一个由1728个核苷酸组成的开放阅读框架,编码分子量约66kDa的576个氨基酸残基的蛋白质。序列相似性分析结果表明,它与苹果中克隆到的AFS1基因具有很高的同源性,核苷酸序列一致性为97.34%,且具有典型的萜类合成酶基因保守结构域。与来源于黄瓜、杉树、松树的α-法尼烯合成酶基因的同源性较低。     

鸭梨PbHCT3基因的克隆及表达分析

羟基肉桂酰CoA:莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(HCT)是植物绿原酸合成的关键酶之一.该研究以鸭梨为材料,采用同源基因克隆的方法,克隆出一个鸭梨的HCT基因,命名为PbHCT3.PbHCT3基因cDNA全长序列为1 731bp,基因编码序列长度为1 317bp,编码438个氨基酸,含有酰基转移酶的2个保守序列HHAAD和DFGWG及保守结构域MVVNVTVRES.实时荧光定量PCR分析表明:PbHCT3基因在幼果果皮、果肉、果心、幼叶及花蕾期花瓣中的表达量较高.随着鸭梨果实生长,果实中PbHCT3基因表达量逐渐降低.研究表明,PbHCT3基因与鸭梨幼嫩组织的生长发育有密切关系.