我国率先成功构建人体内软骨组织

国家“973”计划“组织工程的基本科学问题”项目首席科学家 ,上海第二医科大学曹谊林教授日前在接受记者采访时表示 ,在“973”计划、国家自然科学基金等的支持下 ,近年来 ,针对软骨组织工程研究中的国际性难题和关键性问题 ,我国科学家已经在软骨组织工程的基础研究和应用基础研究方面取得了一系列成果 ,并首次在世界上成功地在人体内构建出软骨组织 ,开创了软骨组织工程临床应用的先河。摘自《科学时报》2 0 0 3年 3月 10日我国率先成功构建人体内软骨组织     

骨组织总RNA的提取技术

目的探讨Trizol试剂提取骨组织总RNA的技术方法。方法采用高速均质仪进行组织粉碎处理,用Tr-izol试剂提取RNA后,分3组进行RNA纯化处理,并通过紫外分光光度计、电泳、Real-time PCR等方法验证RNA的质量。结果用Tirzol试剂从经粉碎处理的骨组织中所提取的总RNA纯度差,只有再进行DNase1消化及有机溶剂再纯化后,才能保证所提RNA完整且纯净。结论从组织中提取的总RNA经DNase1消化及有机溶剂抽提,可提高RNA质量;另外实验证实用紫外分光光度法判断RNA的质量有许多局限性,利用琼脂糖电泳及Real-time PCR方法也能很简便的判断RNA质量。     

工程化软骨支架用壳聚糖基仿生材料研究进展

从材料学的视角介绍了壳聚糖在软骨组织工程支架中的应用情况,分析和总结了现阶段壳聚糖基仿生支架材料的特点,提出用数学和统计的方法研究仿生三维织物的构想,以期明确值得关注的研究方向.     

软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制和鉴定

构建了含有软骨组织特异性Ⅱ型胶原A1启动子和Cre重组酶基因的转基因载体pcol2Al-Cre。323枚小鼠受精卵经显微注射引入转基因片段后,分别移植至14只假孕母鼠的输卵管使其发育。共得到仔鼠52只,PCR结果显示其中10只小鼠基因组上有Cre基因的整合,整合率为19．2％。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上携带LoxP位点的条件基因打靶小鼠交配,以检测Cre酶介导的重组及其组织特异性。PCR结果表明：col2Al-Cre转基因小鼠软骨组织中表达的Cre重组酶成功地介导了LoxP之间的重组。此结果通过Southern杂交得到了进一步的证实。     

氧化石墨烯在骨组织工程中的应用

传统骨组织工程支架材料存在强度不足、生物活性低等缺点。近年来,碳纳米材料在骨再生方面展现出独特的优势。氧化石墨烯(graphene oxide, GO)是一种具有代表性的二维碳纳米材料,作为石墨烯的氧化形式,GO具有优异的力学性能、良好的生物相容性、大比表面积、易于改性等特点。GO不仅能够直接促进干细胞黏附、增殖和分化,还可以改善传统支架的机械性能、生物活性、抗菌能力、免疫调节能力等,基于GO的复合材料有望成为理想的骨再生支架。综述GO的物理化学性能、生物相容性、生物降解和清除等特性,总结GO作为涂层、控释材料和复合支架在骨组织工程中的最新应用,并对其未来研究方向进行展望。     

氟对人成骨细胞和小鼠骨组织caspase14表达影响

目的:初步探讨氟对人成骨细胞saos-2和小鼠骨组织中caspase14表达的影响。方法:体外建立人成骨细胞染氟模型,以不加入氟入培养基者为空白对照,实验组培养基内分别含氟化钠5、10、20、40 mg/L。以氟化钠加入饮水中,建立小鼠染氟模型。应用Western blot法检测不同剂量氟(0、5、10、20、40 mg/L)对成骨细胞saos-2中caspase14的表达,再用免疫组织化学检测不同染氟剂量(0、50、100、150 mg/L)染氟小鼠骨骼上caspase14的表达情况。结果:Caspase14在成骨细胞saos-2中各实验组表达明显上调(均P0.01),5 mg/L组表达最高。染氟小鼠模型骨组织中亦有表达,染氟组表达均高于对照组(均P0.05),且有逐渐增高趋势。结论:Caspase14在染氟成骨细胞和骨组织中的高表达参与了氟诱导细胞凋亡的过程。     

人脐血CD44^＋细胞成骨转化的研究

本研究从人脐血中分离可转化为成骨细胞的干细胞成分,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。首先应用干细胞分离系统分离出脐血非CD34^＋细胞,贴壁细胞传代后取3代细胞应用流式细胞仪进行细胞表型检测,并用含1×10^-2mol／L地塞米松、10mol／L β-磷酸甘油钠、50mg／L抗坏血酸的成骨诱导剂培养基,连续培养21～30d。     

复合血管内皮细胞的不同孔径磷酸钙陶瓷体内血管化的比较研究

目的:比较不同孔径多孔β-TCP材料复合血管内皮细胞后的体内血管化,探索孔隙大小对人工骨材料体内血管形成的作用。方法:血管内皮细胞与连通径均为100μM,而孔径分别为200-300μM和300~400μM两种不同孔隙结构β-TCP材料复合后包埋入36只成年新西兰兔的腿部肌肉内,相同结构的空白β-TCP材料作对照,术后2、4、8周对材料进行组织学观察、免疫组织化学分析,计算新生血管密度。结果:复合血管内皮细胞的材料血管形成启动过程早于空白对照组,术后第4周血管管腔已基本成形,并基本稳定,至第8周开始血管充盈,微血管密度高于对照组(P0.05)。而不同孔径的材料比较发现,不论是复合血管内皮细胞的材料还是空白材料,孔径300~400μM的材料内新生血管密度显著显著高于孔径200-300μM材料(P0.05)。结论:材料孔隙较大的材料更有利于材料体内的血管化,而复合血管内皮细胞后,更加快了其血管化进程,这一研究结果提示材料孔隙间的连通是影响材料体内血管化的关键因素,该研究结论将为改善人工骨材料体内血管化的方法提供新的思路,同时也为骨移植材料的最优结构的选择提供一定的借鉴。     

体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的研究大鼠骨髓基质干细胞的生长特点和诱导条件下的成骨能力。方法通过密度梯度离心和贴壁培养法分离成年大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、p甘油磷酸纳和维生素c的诱导分化培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化并检测碱性磷酸酶活性和细胞矿化作用。结果原代培养基质干细胞首先形成细胞集落,14d时集落间接近融合;传代细胞体积变大,约5～7d传代一次。诱导条件下,细胞碱性磷酸酶活性明显增高,并出现了矿化结节。结论骨髓基质干细胞易于分离培养及体外扩增,成骨能力肯定,可作为骨组织工程的种子细胞。