环氧树脂固定化的Bacillus sp.DL-2胞外蛋白酶在拆分(±)-乙酸苏合香酯中的应用

环氧基是一个非常活跃的基团,它能与酶、蛋白质和核酸等生物分子发生反应形成共价键,有利于生物分子的固定化。经共价结合法固定化的酶其稳定性及重复使用性可得到显著提高。用环氧树脂ES-103B为载体采用共价结合法对海洋细菌Bacillus sp. DL-2的胞外蛋白酶进行固定化,经过单因素实验优化条件得出最优固定化条件为:p H 8. 0的胞外蛋白酶溶液,25 g/L的ES-103B,45℃下反应8h。采用此最优条件下的固定化酶拆分(±)-乙酸苏合香酯制备出了e. e. p=97. 5%的(R)-1-苯乙醇(产率为45. 0%)和e. e. s=99. 2%的(S)-乙酸苏合香酯(产率为83. 9%)。该固定化酶拆分(±)-乙酸苏合香酯在重复使用8次后制备出的(R)-1-苯乙醇的e. e. p仍大于90%,且固定化胞外蛋白酶在4℃下具有较好的储存稳定性。     

严重急性呼吸综合征冠状病毒2膜蛋白对宿主细胞pre-mRNA 3"UTR加工的影响

目的 研究严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）膜蛋白对宿主细胞mRNA前体（pre-mRNA）3"非翻译区（UTR）加工的影响。方法 本研究以人肺上皮细胞系A549为模型，利用瞬时转染在细胞内过表达SARS-CoV-2膜蛋白；利用RNA-Seq测序技术及生物信息学分析方法，系统性描绘宿主细胞选择性多聚腺苷酸化（alternative polyadenylation，APA）事件；Metascape数据库对发生显著APA变化的基因进行功能富集分析；RT-qPCR验证靶基因3"UTR长度变化；蛋白质免疫印迹（Western blot）检测目的蛋白表达水平。结果 SARS-CoV-2膜蛋白外源表达后宿主细胞内共813个基因发生显著APA变化。GO和KEGG分析显示，差异APA基因广泛参与有丝分裂细胞周期、调节细胞应激等生物过程，涉及病毒感染和蛋白质加工等。从中进一步筛选出AKT1基因，在IGV软件中显示3"UTR延长；RT-qPCR验证AKT1基因的3"UTR长度变化趋势；Western blot结果显示AKT1蛋白磷酸化水平增加。结论 SARS-CoV-2膜蛋白潜在影响宿主pre-mRNA的3"UTR加工，其中参与多种病毒性生物过程的AKT1基因 3"UTR延长，且其编码的蛋白质功能在细胞内被激活。     

自病人气管灌洗物中分离出一株嗜肺性军团杆菌

本文报道了用自制的蓝藻军团杆菌选择性培养基从病人气管灌洗物中分离到一株嗜肺性军团杆菌(Legionella pneumophila)并与BCYE及硝酸铁琼脂平板等培养基作了比较,发现该菌在蓝藻军团杆菌选择性培养基上生长最好。生化、动物试验;细菌学、血清学的鉴定和诊断及临床治疗效果观察均与军团病杆菌(LDB)的鉴定标准相符合,证明经分离得的是一株嗜肺性军团杆菌血清6型菌株。     

水解淀粉的酿酒酵母菌的构建

把黑曲霉糖化酶cDNA,酵母磷酸甘油激酶基因启动子区和终止区以及酵母Ty因子的δ序列构建成整合型的糖化酶表达分泌质粒pKG 1。该质粒转化酿酒酵母Y33得到整合型转化子。转化子分泌糖化酶活力在3.0μ/ml以上,在以5％可溶性淀粉为碳源的培养基中静止培养7d,淀粉利用率达86％,生成酒精的浓度与以5％葡萄糖为碳源时相等。     

酸水解蚕蛹制备复合氨基酸的研究

采用硫酸水解法,以蚕蛹制取复合氨基酸产品,得到氨基酸态氮分别为９．０５％和１３．４５％的食用复合氨基粉和精制复合氨基酸粉。食用复合氨基酸粉含有１８种氨基酸,其中必需氨基酸含量为３９．２％。食用复合氨基酸粉的制备方法经工厂小批量生产证实,其工艺简单易行,适合于中小企业采用,该产品的质量优良,生产成本低廉,具有市场竞争力。     

脂肪酶水解植物油的研究

本文报导了薄层层析法及高压液相色谱法定性定量地测定植物油甘油酯的组成,对不同来源的脂肪酶对植物油的水解进行了研究。实验结果表明,不同来源的脂肪酶对植物油(橄榄油)的水解性不同,同一脂肪酶水解不同种类的植物油,脂肪酶的水解率也不同,脂肪酶水解植物油有最适pH和最适温度。     

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物,胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性,用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（HL－60）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程,提取物经反相C18中压液相色谱,Sephadex LH-20凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质。经NMR和MS鉴定为7－酮基胆固醇（7－ketocholesterol,7-KC)。体外琼脂培养条件下7－KC对小鼠WEHI－3和S－180细胞较对正常小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用,7－KC对HL－60细胞增殖较对正常人骨髓CFU－GM有更强的抑制作用。     

H~＋－ATPase单位点水解过程中Fo构象的变化

利用Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶复合中的Ｆｏ的色氨酸荧光,观察了复合体中Ｆ１结合ＡＴＰ或ＡＤＰ时,Ｆｏ的荧光猝灭常数的变化结果表明Ｆ１结合ＡＴＰ或ＡＤＰ时Ｆｏ可得到不同的猝来常数,也就是Ｆｏ会产生不同的构象变化。这些结果说明了Ｈ＾＋ＡＴＰ酶合ＡＴＰ合成的过程中Ｆ１与Ｆｏ之间存在着构象之间的通信与传递。     

猫后内侧上雪氏区视神经元对运动棒反应的取向和方向特征

猫后内侧上雪区（ｐｏｓｔｅｒｏｍｅｄｉａｌｌａｔｅｒａｌｓｕｐｒａｓｙｌｖｉａｎａｒｅａ,ＰＭＬＳ）的绝大多数神经元（１７１／２００）对运动棒的取向调谐,６２％（１２４／２００）细胞的取向调谐宽度（半高波宽）小于９０°：按方向选择性和取向选择性可分辨出几类特征明显的细胞类型：１、强取向和强方向选择性细胞;２、强取向调谐的双向选择细胞;３、弱取向调谐的强方向选择细胞;４、无取向无方向选择性细胞;以及５、特征不明显的或中间类型细胞。它们与最近光学记录揭示的鹰猴中颞叶视区（ｍｉｄｄｌｅｔｅｍｐｏｒａｌｖｉｓｕａｌａｒｅａ,ＭＴ）的组织有很好的吻合。     

蛋白质特异性断裂试剂研究进展

蛋白质特异性断裂试剂是近年来发展起来的一些具有特异性断裂肽键功能的化学工具．这些断裂试剂可分为两类,一类通过氧化断裂机制实现蛋白空间结构特异性切割,另一类通过水解断裂机制实现序列特异性切割．蛋白质特异性断裂试剂在蛋白质序列测定,蛋白质的结构与功能研究,蛋白质与核酸相互作用研究以及新型化学治疗药物的合成等方面有着广阔的应用前景．