几种药物抑制马传染性贫血病毒和人免疫缺陷病毒的实验研究

用马传染性贫血病毒—驴胚肺二倍体细胞(EIAV-DELDC)为实验体系,以细胞中病毒逆转录酶活性及病毒相关抗原的表达为观察指标,检测了叠氮胸苷(AZT)、三氮唑核苷(Ribavirin,病毒唑)、磷羧基甲酸钠(PFA)和苏拉明等4种已知抗人免疫缺陷病毒(HIV-1)药物对马传染性贫血病毒的抑制作用。结果表明,PFA、AZTTP(三磷酸AZT)和苏拉明均能抑制病毒相关抗原的表达,AZT虽无此作用,但能抑制细胞内逆转录酶活性。用~3H-TMP掺入法比较了PFA、AZTTP、苏拉明对体外无细胞系EIAV逆转录酶粗提物和HIV-1基因工程产物逆转录酶活性的抑制作用表明,两种逆转录酶对苏拉明的敏感性相近,而HIV-1逆转录酶对PFA和AZTTP的敏感性较EIAV者高约100倍。又以无细胞系中逆转录酶活性测定法,检测了12种中药提取物的抑制作用,其中小柴胡汤对EIAV和HIV-1逆转录酶活性都有抑制作用,IC_(50)为717μg/ml和700μg/ml(生药浓度)。小柴胡汤对两种病毒感染细胞中抗原的表达和HIV引起细胞病变都有抑制作用,对HIV-1的抑制比EIAV强。这些结果表明,EIAV-DELDC体系可考虑作为抗HIV-1药物筛选模型。     

1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞钾离子通道的作用

目的：研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流（IK）、内向整流钾电流（IK1）的作用。方法：实验用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳的方法记录心室肌细胞的延迟整流钾电流（IK）、内向整流钾电流（IK1）。结果：①应用S1P（1．1μmol／L）后IK从（1．24±0．26）nA降至（0．95±0．23）以（P〈0．01,n=6）,而S1P（2．2μmol／L）组IK从（1．43±0．31）nA下降到（1．02±0．28）nA,统计学有显著性差异（P〈0．01,H=6）.而S1P（1．1μmol／L）＋苏拉明（Summin）（200μmol／L）组与对照相比,IK峰值从（1．29±0．26）nA下降（1．26±0．37）nA,统计学无显著性差异（P〉0．05,n=6）．②应用S1P（1．1μmol／L,2．2μmol／L）后与对照组比较,S1P（1．1μmol／L,2．2μmol／L）分别使内向整流钾电流（IK1）峰值从（-8．94±2．01）nA和（-8．81±1．55）nA下降到（18．86±1．59）nA和（-8．55±1．39）nA,统计学无显著性差异（P〉0．05,n=6）.结论：S1P可降低豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流（IK）的幅值,同时S1P对豚鼠心室肌细胞内向整流钾通道（IK1）没有作用。     

Ⅰ-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌动作电位和收缩力的影响

目的研究1-磷酸鞘氨醇(SIP)对豚鼠心室肌动作电位(AP)和心肌收缩力(CF)的影响.方法实验采用标准玻璃微电极细胞内记录技术记录心室肌细胞动作电位(AP)肌力换能器记录心肌收缩力(CF).结果①应用0.1μmol/LSlP后心室肌动作电位幅度(APA)和时程(APD)与应用SIP前比较差异无显著性,而应用1.0μmol/LSlP,10μmol/L SIP后心室肌动作电位的幅度(APA)与应用SIP前比较明显降低而动作电位的时程(APD)与应用SIP前比较明显延长(P＜0.01).②应用1.0μmol/L SIP和10μmol/LSIP后心室肌的CF与给药前相比明显增强(P＜0.01),应用0.1μmol/LSlP后心室肌的CF与给药前比较差异无显著性(P＞0.05).而加入SIP特异性G蛋白耦联内皮细胞分化基因(EDG)受体阻断剂苏拉明后,SIP的上述作用与给药前比较差异无显著性(P＞0.05).结论SIP可以降低心室肌动作电位幅值延长动作电位时程,增加心室肌收缩力,并且是通过其特异性的G蛋白耦联内皮细胞分化基因(EDG)受体介导而产生这些作用,有一定的剂量依赖性.     

人参皂苷Rg3联合苏拉明通过下调TGF-β1表达抑制小鼠肺癌生长转移

目的:肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,中晚期肺癌以放化疗为主,毒副作用大,观察低毒副作用的人参皂苷Rg3和苏拉明联合对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用及机制,为临床安全高效治疗肺癌提供实验资料.方法:将40只接种好Lewis肺癌细胞的C57BL6小鼠随机分为5组,每组8只:A组:对照组、B组:顺铂组、C组:人参皂苷Rg3组、D组:苏拉明组、E组:人参皂苷Rg3联合苏拉明组.接种第4天后开始药物干预,第20天处死,取肺组织,计肺转移结节数,剥离.移植瘤,计瘤重,计算抑瘤率,通过RT-PCR及Western-blot检测移植瘤TGF-β1的mRNA及蛋白的表达.结果:各药物干预组的肺转移结节数及瘤重明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),人参皂苷Rg3联合苏拉明组最明显;BCDE各组抑瘤率分别为:(19.69±5.61)％、(35.37±8.97)％、(35.85±7.55)％和(49.39±6.99)％,ABCDE各组的肺转移率分别为100％、100％、100％、87.5％和62.5％;各药物干预组的TGF-β1的mRNA及蛋白的表达均低于对照组(P＜0.01),且人参皂苷Rg3联合苏拉明组TGF-β1的表达明显低于人参皂苷Rg3组和苏拉明组(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg3联合苏拉明具有抑制小鼠Lewis肺癌的生长转移作用,对晚期肺癌的抑制可能与下调TGF-β1的表达有关.     

1-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌动作电位和收缩力的影响

目的：研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）对豚鼠心室肌动作电位（AP）和心肌收缩力（CF）的影响。方法：实验采用标准玻璃微电极细胞内记录技术记录心室肌细胞动作电位（AP）肌力换能器记录心肌收缩力（CF）。结果：①应用0．1μmol／LS1P后心室肌动作电位幅度（APA）和时程（APD）与应用SIP前比较差异无显著性,而应用1．0μmol／LS1P,10μmol／LS1P后心室肌动作电位的幅度（APA）与应用S1P前比较明显降低而动作电位的时程（APD）与应用S1P前比较明显延长（P〈0．01）。②应用1．0μmol／LS1P和10μmol／LSIP后心室肌的CF与给药前相比明显增强（P〈0．01）,应用0．1μmol／LS1P后心室肌的CF与给药前比较差异无显著性（P〉0．05）。而加入S1P特异性G蛋白耦联内皮细胞分化基因（EDG）受体阻断剂苏拉明后,S1P的上述作用与给药前比较差异无显著性（P〉0．05）。结论：S1P可以降低心室肌动作电位幅值延长动作电住时程,增加心室肌收缩力,并且是通过其特异性的G蛋白耦联内皮细胞分化基因（EDG）受体介导而产生这些作用,有一定的剂量依赖性.     

鸭乙型肝炎病毒复制复合体中内源性DNA聚合酶测定方法的建立及其应用

应用~3H-TTP作为放射性掺入底物,建立了鸭乙型肝炎病毒复制复合体(DHBVRCs)内源性DNA聚合酶的测定方法,研究了该酶的生化特性,试验了12种药物对该酶的抑制作用。结果该方法测定的内源性DNA聚合酶为DHBV特异的,其活性依赖于4种dNTP和Mg~ ++的存在。最适Mg~++浓度为20mM。NP-40可刺激其活性。放线菌素D仅能抑制其30％的活性,膦羧基甲酸钠(PFA)、膦羧基乙酸钠(PAA)和苏拉明可抑制此酶,它们的半数抑制浓度分别为8.5μM、860μM和9.25μM。而Ara-AMP等几种药物对该酶无抑制作用。应用放射性掺入电泳自显影法证明,PFA对DHBV RCs中依赖DNA和RNA的DNA聚合酶均有显著的抑制作用。