2003年国际生物学奥林匹克竞赛实验考试试题(3)

参赛的考生：在“动物形态、解剖和系统学”的实验中，你们将要完成3个试题：     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员。我们准备用溴化氰活化介质偶联α-银环蛇毒素装柱,溴化氰活化的琼脂糖4B是某知名公司的,空柱还没定,说明书上推荐的是HR 16/10。请问这款柱子我们可以用吗?急切盼望您的回复,谢谢!     

姜老师信箱

<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第十二期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,向您请教渗透冲击法破菌的问题。我把E.coli培养到OD 0.5左右,加40%蔗糖冰上10min,然后离心直接加与原箘液1,2,3,4倍体积的蒸馏水,放置观察,一直没有观察到细菌破坏。我们的蛋白是在胞浆里面的,也看了一些文献,似乎渗透冲击更适用于表达在细胞膜和细胞壁之间的周     

我心中的王喜忠老师

<正>一转眼距我从四川大学研究生毕业已经快十年了。我从一个懵懂、好奇求知的少年,到一个年过而立之年的学者;从当年的"被人师"变成了"为人师",站在了美国东部一所大学的讲台上"传道授业解惑",同时还从事着我最喜爱的遗传学科研工作。这期间,和四川大学王喜忠教授的一段师生缘分可以说让我受益匪浅。     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是蛋白质研讨班的学员,我的课题是纤维素酶,上您的课收获很大,因为发现自己有好几步实验都做的不正确。在此我想咨询您几个问题:1.我只需要将纤维素酶脱盐、脱水浓缩,选用硫酸铵沉淀,之后透析的方法是否正确?有没有更好的方法?     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!非常感谢您上次的建议。我们用您说的方法重新尝试了2种不同的胞内表达蛋白,电泳后发现渗透冲击法能有效的把蛋白释放到上清中。虽然目前效率还没有达到100%(目测可能有50%-60%左右的目的蛋白释放到上清中),但相对之前始终没有蛋白的情况已经好了很多。现在我还有2个细节问题想请教一下:1.这种方法的效率能达到90%以上么?如果可以,我们实验的效率能否通过增加低渗液(水)的体积来进一步提高?     

思维跳跳糖

变回正常大小后,糖兄糖妹还想继续探寻蜻蜓飞行的秘密,于是,他们用网兜抓了一只小俘虏,带回屋子……趣事贴吧我的小表弟午休时,一只蚊子在他的胳膊上叮了一个包。我看见后,帮他抹了一些花露水,这时,小表弟突然醒了,看着胳膊大声嚷道:哎呀,不好了,蚊子在我胳膊上撒了一泡尿。     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,在上课时听您讲过用Protein A纯化单克隆抗体的效果并不完美,请问这是不是由于纯化后抗体容易形成二聚体或多聚体,而导致活性下降?我还想请教一下:1.如果只     

姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是蛋白质研讨班的学员,实验中有个问题向您请教。用硫酸铵沉淀镍柱亲和纯化的蛋白溶液后,用20mM PBS(pH6.8)复溶,接着用G25 5ml预装柱在AKTA纯化仪上脱盐,缓冲液为20mM PBS(pH6.8),出现了两个几乎等高的UV峰。第一个峰先于电导峰,第二个峰与电导峰重叠,SDS-PAGE显示两个峰均为目的蛋白(57kDa),而且4℃放置过夜之后,两个峰对应的溶液变浑浊。请您指点!     

我心中的王喜忠老师

一转眼距我从四川大学研究生毕业已经快十年了。我从一个懵懂、好奇求知的少年,到一个年过而立之年的学者;从当年的＂被人师＂变成了＂为人师＂,站在了美国东部一所大学的讲台上＂传道授业解惑＂,同时还从事着我最喜爱的遗传学科研工作。这期间,和四川大学王喜忠教授的一段师生缘分可以说让我受益匪浅。