鼠兔核质杂交胚胎早期发育的研究

细胞核移植技术已被证明是研究发育中核质相互关系的非常重要的手段之一,电融合技术也是近十年发展起来的新型细胞融合技术。本实验运用这两项技术,进行了鼠、兔目间核质杂交实验,小鼠8-细胞核在激活的兔去核卵母细胞中,发生了染色体超前凝聚及核膨胀,融合卵移植到小鼠输卵管4.5天后,冲洗出,有5.4%的重构卵发育到囊胚期,通过染色体检查,囊胚细胞中均为小鼠染色体,其中一个囊胚为正常小鼠核型(2 n=40,XX)。通过本实验,我们认为:鼠兔远缘核质杂交胚胎的早期发育是可能的。     

细胞核CaMK和Calcineurin 对大鼠心肌肥厚发生的作用

目的:研究大鼠心肌肥厚时,钙依赖的蛋白激酶和蛋白磷酸酶在心肌细胞膜、细胞浆和细胞核的分布规律,以探讨核钙信号与核反应在心肌肥厚发生过程中的病理生理意义.方法:制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,同位素32P掺入法分别测定心肌细胞核、细胞浆和细胞膜的蛋白激酶活性及用无机磷生成显色法测定其蛋白磷酸酶活性.结果:腹主动脉缩窄术后4周大鼠心肌显著肥厚,伴有明显的血液动力学异常.与正常对照组相比较,腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞核钙调素蛋白激酶(CaMK)活性增加101.1%(P＜0.01),其膜的酶活性升高40.2%(P＜0.01),而胞浆的酶活性不变(P＞0.05);心肌细胞核钙调神经磷酸酶(Calcineurin)活性增加43.6%(P＜0.05),膜和胞浆中其活性增加无显著性(P＞0.05).正常组和腹主动脉缩窄心肌肥厚组心肌细胞CaMK和Calcineurin活性分布为核＞膜＞胞浆(P＜0.01).结论:腹主动脉缩窄心肌肥厚时核内钙依赖的CaMK和Calcineurin活性增加,提示压力超负荷时细胞核内钙调节的蛋白磷酸化和去磷酸化水平增高,可能在介导心肌肥厚的发生中起重要作用.     

哺乳动物体细胞核移植研究进展

体细胞核移植技术已经在基础研究领域与产业化应用领域体现出了重要的价值,因而体细胞核移植技术及其相关研究已经成为了生物领域的持续性研究热点,但是围绕体细胞核移植技术仍然存在许多质疑,其中最主要的就是体细胞核移植的效率较低。尽管如此,体细胞核移植研究仍然在近年来取得了令人瞩目的成就,包括小鼠与恒河猴核移植胚胎干细胞系的建立。该文就体细胞核移植的研究历史与进展进行简要的论述,同时针对体细胞核移植研究中的细胞重编程与治疗性克隆研究中的发展与问题进行剖析,希望能够积极推动治疗性克隆的研究进展,加速核移植与干细胞技术在产业化领域中的应用。     

PCNA和BCG在膀胱肿瘤及炎症中的表达

应用抗酸（ＩＫ）染色和结核菌抗体（ＢＣＧ）、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫组化染色方法,对１１９例膀胱肿瘤及炎症进行了检测。结果显示：ＩＫ抗酸染色、ＢＣＧ免疫组化染色阳性率分别为：膀胱癌为３５２、３６７％;乳头状瘤为４０％、４４％;慢性炎为４２３％、５０％。ＰＣＮＡ阳性细胞指数膀胱癌与粘膜慢性炎比较差异非常显著（Ｐ＜０００１）;乳头状瘤与慢性炎比较差异显著（Ｐ＜００５）。提示结核菌Ｌ型感染与肿瘤的发生和发展可能有关     

应用组织芯片技术研究MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达及其意义

目的探讨MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的联合表达、相关性及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化技术检测143例宫颈浸润癌(ICC)、20例癌旁正常宫颈上皮(NCE)中MMP-9和PCNA的表达,统计分析MMP-9、PCNA表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移等临床病理因素的关系。结果 MMP-9、PCNA在宫颈癌组织中的阳性率分别为89.5%(128/143)和93.7%(134/143),较正常宫颈组织中的阳性率40.0%(8/20)和15.0%(3/20)显著增高(P=0.000)。MMP-9的表达与病理分级(r=0.342,P=0.000)、淋巴结转移(r=0.197,P=0.018)和间质浸润深度(r=0.203,P=0.015)呈正相关。PCNA表达与临床分期(r=0.228,P=0.006)、病理分级(r=0.330,P=0.000)呈正相关。MMP-9和PCNA在宫颈癌组织中的表达强度呈正相关(r=0.228,P=0.006),二者表达一致的比例高达87.41%(125/143)。结论MMP-9和PCNA在宫颈癌中的异常表达与肿瘤的分化、侵袭和发展密切相关,联合检测二者的表达对于进一步理解宫颈癌的生物学行为和判断预后有一定价值。     

体细胞核移植胚胎核重编程的研究进展

尽管在多种哺乳动物种系中成功制备了体细胞克隆后代,但当前的克隆技术仍有许多亟待解决的问题。体细胞核移植胚胎大多存在许多发育异常,造成了妊娠早期高流产率和出生后高死亡率。有研究认为,克隆胚胎发育障碍的一个重要的原因是供体细胞的遗传重编程不完全。哺乳动物种系中,DNA甲基化是胚胎发育期转录调节的必需步骤,除了单拷贝基因序列外,在基因组很多的区域都可以观测到克隆胚胎的异常甲基化。此外,克隆胚胎的基因印迹也存在异常。     

转基因克隆牛胎盘中印迹基因PEG10的DNA甲基化水平

低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死亡是否与其胎盘中印迹基因的甲基化的重编程程度相关,文章通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)和亚硫酸氢盐联合限制性内切酶分析法(Combined bisulfite restriction analysis,COBRA),对印迹基因PEG10在围产期死亡且存在发育缺陷的转基因克隆牛的胎盘(死亡组)和存活的转基因克隆牛的胎盘(存活组)与正常对照牛胎盘(对照组)的DNA甲基化水平进行了详细的比较。结果发现,与对照组相比,PEG10基因在死亡组上表现出异常的超甲基化水平,而存活组与对照组相比无显著性差异。研究结果显示,胎盘中印迹基因的DNA甲基化表观重编程不彻底可能是导致转基因克隆牛发育异常进而死亡的主要原因之一。