哺乳动物及人精子膜离子通道的研究进展

离子的跨膜转动对精子的生理活动起重要的作用。近年,应用膜片钳及人工膜重组等研究通道有关的电生理技术,人们直接观察到哺乳动物及人精子膜上Ｋ、Ｎａ＾＋、Ｃａ＾２＋、Ｃｌ通道的存在。这些结果为揭示精子成熟、获能精卵结合反应等生理过程的某些细节提供了有有的资料,特别是对人精子膜的研究,还为临床应用提供了可能。     

家兔精子膜蛋白rsp10基因的克隆和特征分析

 sp10基因在精卵识别过程中起着重要作用 .从家兔睾丸cDNA文库中克隆了家兔的sp10基因 (rsp10 ) ,cDNA序列全长 12 82bp ,包含 10 0 5bp开放阅读框 .由开放阅读框推测出的氨基酸序列与人、狒狒、狐和小鼠的SP10氨基酸序列之间存在较高水平的同源性 ,同源性分别为 70 %、69%、68%和 61% .在大肠杆菌中表达rsp10基因 ,获得重组rSP10 .用重组rSP10免疫雌性母兔 ,得到rSP10专一性多抗 .对精子膜蛋白进行免疫印迹分析发现 ,rsp10基因在家兔睾丸中的表达呈现多态性 .rsp10基因在GenBank的登录号为 :AF2 51558.     

一种与受精有关的人精子膜蛋白（BS—17）的分离纯化

本文盐分级分离,Ｍｏｎｏ Ｑ ＦＰＬＣ及ＳＤＳ－聚烯酰胺胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）等方法从人精子ＣＨＡＰＳ抽提液中分离纯化出一种与不育病血清中抗精子抗体发生特异反应的ＢＳ－１７人精子膜蛋白。该蛋白为一糖蛋白,分子量为１７．５５±２．１５ｋＤ,等电点为５．６５,中性己糖含是为１６．６７％。在人精子上主要分布于顶体区域,不同于已有报导的人精子膜蛋白。在体外实验中抗ＢＳ－１７多克隆血清可以显著影响人精子     

编码人精子膜蛋白YWK-Ⅱ基因在人睾丸组织表达的研究

抗人精子膜蛋白的单克隆抗体YWK-Ⅱ,能引起人精子凝集和抑制体外穿卵,并发现在睾丸组织中至少有4种形式的mRNA对应于YWK-Ⅱ抗原,可能是同一基因转录而不同方式剪切的产物.从人睾丸λgt10 5’Stretch cDNA文库中筛选,得到1个4kb大小的cDNA,命名为 C211.在 C211的 5’变异区和 3’相对稳定区中选择了2段.DNA分别作为转录探针的模板,5’端为943 bP和3’端为1.5kb的片段,将以上二个片段与含SP6和T7启动子的PGEM3Z载体进行重组,采用体外转录,地高辛标记的方法,分别合成2,tRNA探针,对人睾丸组织进行原位杂交.人睾丸YWK-ⅡC211基因片段地高辛(Dig)标记的5’端和3’端Antisense cRNA探针均与支持细胞质中的mRNA杂交,证明YWK-Ⅱ抗原蛋白在Sertoli细胞中合成,并又镶嵌在生精细胞膜上,最终定位于精子头部赤道极.     

家兔精子膜蛋白rSP10在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备

为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中,N端具有His6肽的融合蛋白re-rSP10得到高效表达,表达产物达细菌总蛋白的67%。经DEAE柱层析纯化表达产物,re-rSP10,产量约为50mg/mL培养物。Western实验结果表明,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re-rsp10,说明大肠杆菌表达的re-rSP10具有免疫原性。用纯化的re-rSP10免疫雌性兔,得到re-rSP10专一性多克隆抗血清。将re-rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性,但获能精子凝集现象并不明显。     

一种与受精有关的人精子膜蛋白（BS－17）的分离纯化

本文用盐分级分离,ＭｏｎｏＱＦＰＬＣ及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）等方法从人精子ＣＨＡＰＳ抽提液中分离纯化出一种与不育病人血清中抗精子抗体发生特异反应的ＢＳ－１７人精子膜蛋白。该蛋白为一糖蛋白,分子量为１７．５５±２．１５ｋＤ,等电点为５．６５,中性己糖含量为１６．６７％。在人精子上主要分布于顶体区域,不同于已有报导的人精子膜蛋白。在体外实验中抗ＢＳ－１７多克隆血清可以显著影响人精子的获能（ｐ＜０．０２５）和对去透明带仓鼠卵的穿透（ｐ＜０．００５）,但不影响人精子运动性及与去透明酯酸带仓鼠卵的结合。小鼠体内被动免疫实验结果证明抗ＢＳ－１７多抗血清具有明显地抑制受精的功能（ｐ＜０．００１）。     

一种与Calpastatin具有部分同源结构的人精子膜蛋白的发现与研究

在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白,命名为ＢＳ－１７。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达库中克隆了编码ＢＳ－１７的ｃＤＮＡ片段。序列分析表明ＢＳ－１７ｃＤＮＡ片段长７９１ｂｐ,开放阅读框架５５８ｂｐ,可编码１８６个氨基酸。经数据库检索,该ｃＤＮＡ片段与人Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ（Ｃａ￣（２＋）依赖的半胱氨酸蛋白酶ｃａｌｐａｉｎ抑制剂）基因３’端顺序具有９９．７％的同源,与Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ蛋白质羧基末端同源性为９９．５％。用ｃＲＮＡ进行组织原位杂交结果表明,ＢＳ－１７基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。     

人精子膜蛋白片段在沙门氏菌中的表达——一种制备抗生育疫苗的途径(英文)

合成编码一种人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区的一段多肽片段的双链寡核昔酸链,HSD—2a。用平端连接的方法将其插入到沙门氏菌鞭毛基因fliC(d)的抗原表位IV高变区EcoRV位点,构建了重组质粒pLS408-H1。重组基因在鞭毛负性aroA基因缺失的无致病性沙门氏菌S.dublin SL5928疫苗菌株中表达。经ELISA、电镜免疫胶体金法检测,表明HSD-2a编码的多肽片段成功地在沙门氏菌鞭毛表面表达。融合鞭毛蛋白分子量约为60kD。Western-Blot法检测,提纯的融合鞭毛蛋白与YWK-Ⅱ小鼠抗血清只在60 kD处出现一条结合带。携带重组质粒pLS408—H1的沙门氏菌疫苗菌株极有可能成为抗生育疫苗。     

家兔精子膜蛋白rSP1O在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备

为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中,N端具有His6肽的融合蛋白re-rSP10得到高效表达,表达产物达细菌总蛋白的67%.经DEAE柱层析纯化表达产物,re-rSP10,产量约为50mg/mL培养物.Westem实验结果表明,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re-rsp10,说明大肠杆菌表达的re-rSP10具有免疫原性.用纯化的re-rSP10免疫雌性兔,得到re-rSP10专一性多克隆抗血清.将re-rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性,但获能精子凝集现象并不明显.