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为了将外源基因导入花椰菜原生质体获得转基因植株,本文研究了PEG介导的外源基因在花椰菜下胚轴原生质体中的瞬间表达。(1)20%PEG将质粒pBI221导入原生质体后GUS表达比13%PEG导入的高,但易造成原生质体损伤。(2)热激处理增强表达,但在随后的培养过程中易造成原生质体降解。(3)原生质体状况对表达有重要影响,5d龄下胚轴原生质体比8d龄的表达强。(4)不同质粒及启动子表达强度不同。质粒pKIWI101比pBI221表达强3倍左右。 相似文献
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为研究水稻蜡质基因(waxy)5'上游调控区中存在的顺式作用元件,我们将水稻waxy基因翻译起始声、(ATG)5'上游3.4kb(-2118~+1291bP)片段经外切核酸酶ExoⅢ部分酶解,得到一系列5'端缺失的片段。将这些缺失片段分别与gus基因编码区连接,构建成融合质粒,经PEG介导引入水稻原生质体,26℃培养48h后,定量测定GUS酶活力,并以同时导入的由35S启动子指导的荧光素酶(LUC)基因表达的酶活力作为内对照。结果表明,GUS酶活性随5’上游调控区长度的减少而逐渐减弱。由─861bp缺失至─640bP时,gus基因表达水平有较明显的降低,推测在该区域中可能存在一个顺式作用元件区。 相似文献
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《微生物学免疫学进展》2020,(4)
目的 ELISA检测外用人纤维蛋白原中纤溶酶原残留量,并对其进行方法学验证及应用。方法按照方法学验证的要求,对专属性、线性与定量范围、样品稀释线性、准确性、精密度、耐用性、样品稳定性进行验证分析。应用该方法检测外用人纤维蛋白原主要工艺步骤样品及成品中纤溶酶原残留量,并进行分析和控制。结果专属性验证结果表明,制剂缓冲液对检测结果无干扰,准确性均在(100±10)%以内;线性和定量范围验证结果表明,在0.137~100 ng/mL定量范围内,线性相关系数(R~2)>0.99,对照品回收率均在(100±20)%内,变异系数(coefficient of variation,CV)<5%;样品稀释线性验证结果表明,将样品稀释至0.332~83.050 ng/mL范围内,准确性均在(100±20)%内,CV均<15%;准确性验证结果表明,回收率均在(100±20)%以内;精密度验证结果表明,重复性和中间精密度CV均<10%;耐用性验证结果表明,样品孵育时间缩短至2.0 h,回收率为(89.5±1.4)%,CV为1.5%;样品稳定性验证结果表明,样品室温放置6 h以内,冻融3次以内,准确性均在(100±20)%以内。用此方法检测外用人纤维蛋白原主要工艺步骤样品及成品中的纤溶酶原残留量,结果表明层析步骤去除了95.1%纤溶酶原,是控制纤溶酶原的关键步骤;3批样品纤溶酶原残留量检测结果批间CV<20%,生产工艺稳定。结论该方法线性与定量范围、样品稀释线性均达到可接受标准,专属性、准确性、精密度、耐用性、样品稳定性均良好。应用此方法检测外用人纤维蛋白原中的纤溶酶原残留量,为去除痕量纤溶酶原时提供检测分析手段,有利于人纤维蛋白粘合剂产品质量的控制。 相似文献
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粘合材料作为一种重要的辅助材料,在工业包装、海洋工程以及生物医药等多个领域都有广泛的应用需求。天然存在的粘合剂如贻贝足丝粘合蛋白等具有良好的生物相容性和生物可降解性,但因其来源受限及在生理环境下较弱的粘合性能,因此在生物医药领域的应用受到了限制。从自然生物的粘合现象中汲取灵感,各种利用化学或生物合成方法制备的仿生粘合材料应运而生,针对生物医药领域的特定需求,一些新兴粘合材料在生物相容性、生物可降解性以及组织粘附等方面都表现出在医药领域应用的潜力。展望未来,受自然粘合材料兼具环境响应、自我再生和自修复等特征的启迪,各种生物灵感和生物仿生粘合材料的开发势必是未来的发展热点,而合成生物学技术为创建具有上述特征的活体粘合材料提供了新的可能。 相似文献
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医用粘合剂是能够应用于医疗范畴的一类具有一定生物相容性和高度粘合力的医学材料;并已得到广泛的关注和研究。本文对当前急诊医疗中医用粘合剂的分类、各类粘合剂的作用机理、特点及应用范畴、医用粘合剂复合生物材料构成复合物的基础和应用研究现状等做一回顾及评价,并对未来医用粘合剂的研究和发展趋势进行了展望。 相似文献
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绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达 总被引:9,自引:0,他引:9
绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达@许新萍@黄粤@卫剑文@李宝健¥中山大学生物工程研究中心绿色荧光蛋白,水稻,瞬间表达,β-葡糖苷酸酶绿色荧光蛋白基因在水稻细胞中的高效表达许新萍黄粤卫剑文李宝健(中山大学生物工程研究中心广州510275)关键词绿色荧... 相似文献
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影响花椰菜农杆菌介导转化因素的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
以花椰菜赛雪的带柄子叶为外植体,以MS为基本培养基,GUS基因为报告基因,分析了遗传转化过程中的影响因子,如预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度、延迟筛选时间等对外植体瞬间表达和稳定表达的影响。结果显示,以花椰菜的带柄子叶为外植体,预培养2d,农杆菌菌液为OD6000.3~0.4,侵染8min,共培养2d,乙酰丁香酮浓度为100μmol/L,延迟筛选7d,卡那霉素筛选压为5mg/L为最优的遗传转化方案,转化率最高可达35.7%。另外,GUS瞬间表达率和转化率并不存在绝对的相关性,但瞬间表达分析仍然可以作为外源基因进入受体细胞的指示。花椰菜农杆菌介导转化方案的优化研究为芸薹属蔬菜高效遗传转化提供了技术保障,有利于芸薹属蔬菜遗传育种与种质创新研究。 相似文献
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