骨髓间充质干细胞在脱细胞真皮基质再生过程中的初步研究

较大的腹壁缺损需要应用补片修复来缓解腹横筋膜的张力,人工合成补片的应用一定程度上实现了无张力修补的目的,但它在腹壁外科应用中有诸多的并发症,诸如复发率高,腹腔黏连,肠穿孔导致腹膜炎,侵袭性肠瘘等影响患者术后的正常生活,而脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)作为一种新型的生物材料应用在腹壁外科中能解决上述人工合成补片所带来的并发症发挥强大作用且能与周围组织较好的融合,最后改建成宿主自身组织已并在多学科领域中广泛应用;骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)能参与组织自我修复,并能分化成为多种功能细胞,分泌各种生长因子,在ADM内源性转归过程中可发挥作用。本文就对骨髓间充质干细胞在ADM生物补片应用于临床疝修补术中转归机制的研究做一综述。     

猪脱细胞真皮基质与RV-23抗菌肽复合材料的制备及生物学特性初步研究

目的:制备低免疫原性猪脱细胞真皮基质(PADM)与抗菌肽RV-23的复合材料,并对其生物学特性进行初步评价。方法:将抗菌肽RV-23分别以1、5、20μmol/L的浓度加到直径6 mm、厚约1 mm的低免疫原性PADM上,制备复合材料;菌落计数分析实验检测复合材料的抗菌能力;溶血实验检测复合材料对红细胞膜的裂解能力;CCK-8实验检测复合材料对真核细胞的细胞毒性;Tricine-SDS-PAGE检验RV-23的稳定性。结果:制备了PADM与抗菌肽RV-23复合材料;活菌计数实验表明复合材料对大肠杆菌有很强的抗菌活性,并随着抗菌肽浓度的升高不断增强;溶血实验表明PADM能有效降低RV-23裂解红细胞膜的能力,增加血液相容性;CCK-8实验显示PADM能够有效降低RV-23的细胞毒性,复合材料对人表皮角化细胞HaCaT和小鼠成纤维细胞NIH-3T3几乎没有毒性;Tricine-SDSPAGE实验结果显示复合材料抗菌肽RV-23稳定性较好。结论:PADM/RV-23复合材料比较稳定,不仅具有较强的抗菌性,而且有良好的血液相容性和极低的细胞毒性,有望成为新型创伤修复材料。     

应用脱细胞真皮基质联合肌瓣修复咽喉缺损的护理

喉癌是耳鼻喉科常见的恶性肿瘤之一,目前仍以手术治疗为主。喉部恶性肿瘤切除后导致的各种缺损,常用的修复材料有颈部肌皮瓣、胸骨舌骨肌筋膜、颈阔肌筋膜、甲状软骨外膜等,不同的材质各有优缺点。近年来,随着细胞生物学和组织工程技术的发展,一种新兴的创伤修复材料——异体脱细胞真皮基质（ADM）逐渐兴起,     

真皮成纤维细胞成骨分化的实验研究

目的比较不同诱导剂对真皮成纤维细胞成骨分化的不同影响,探讨成纤维细胞成骨分化机制。方法取新生大鼠皮肤进行组织块培养,真皮成纤维细胞分离培养及鉴定,并分别由地塞米松、1,25(OH)2D3以及地塞米松和1,25(OH)2D3进行成骨分化诱导。分别于诱导后14d行ALP含量测定,21d行茜素红染色,并进行TAZ表达检测。结果真皮成纤维细胞表达波形蛋白,不表达角蛋白;成纤维细胞诱导14d后,1,25(OH)2D3诱导组及地塞米松+1,25(OH)2D3诱导组ALP含量与对照组有显著差异;成骨诱导21d,地塞米松诱导组仅见少量散在红色钙结节形成,1,25(OH)2D3诱导组钙结节数量增高,地塞米松+1,25(OH)2D3诱导组钙结节数量明显增高,直径变大;1,25(OH)2D3诱导组及地塞米松+1,25(OH)2D3诱导组,经TAZ免疫荧光染色,可见部分细胞核表达TAZ。结论地塞米松可促进1,25(OH)2D3诱导真皮成纤维细胞成骨分化。     

钛镍记忆合金牵张器复合脱细胞真皮基质增高犬牙槽嵴的初步研究

目的用成年杂种犬建立钛镍记忆合金牵张器复合脱细胞真皮基质增高犬牙槽嵴动物模型,为下一步利用钛镍记忆合金牵张器行下颌后牙牙槽嵴增高术奠定基础。方法健康成年雄性杂种犬4只。全麻下拔除双侧下颌4个前磨牙和第一磨牙,1个月后拍摄双侧后牙区X线光片,观察拔牙窝愈合情况。采用4种类型的牵张器随机在4只犬的下颌两侧行牵张手术并观察牵张后1周和1月牙槽嵴增高的情况。结果拔牙后1个月,牙槽嵴黏膜愈合良好。X线片示下颌神经管清晰可见,其上方牙槽窝内有较低密度骨质存在。放置4种牵张器牵张术后1周、1月后牙槽嵴增高的高度分别为3.24 mm、3.76 mm、4.58 mm、5.09 mm;3.15 mm、3.67 mm、4.64 mm、5.01mm,术后一周X线可见后有明显的牵张间隙,1月时牵张区有新骨形成,骨密度增高。结论犬耐受力强,后牙区下颌骨体积大,手术易操作,是理想的牙槽嵴萎缩动物模型。拔牙后1个月,拔牙创愈合良好,可以进行牵张手术。D组＂S＂形牵张器牵张后的高度比较理想,能满足后期种植体的植入。     

人类巨细胞病毒感染树鼩原代真皮成纤维细胞诱导凋亡特性

人类巨细胞病毒(HCMV)流行广泛,危害严重,由于其严格的物种特异性限制,动物模型缺乏,严重阻碍了对其致病机制的研究及药物、疫苗的研发。本研究对树鼩(Tupaia belangeri)来源的原代真皮成纤维细胞感染HCMV后的细胞死亡现象进行了初步探索。首先,观察了感染后细胞病变和死亡情况,使用细胞增殖检测试剂盒测定了细胞活力;其次,对凋亡相关因子bax、bcl-2和未折叠蛋白反应相关因子chop、atf4、xbp1s转录水平的差异进行了逆转录荧光定量PCR检测与分析;然后利用免疫蛋白印迹技术检测并分析了主要病毒蛋白IE1、UL44和凋亡相关因子Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP的表达水平;最后结合膜联蛋白-V和碘化丙啶双染色法从生物化学角度对细胞死亡类型进行了鉴定。结果显示,细胞病变和死亡情况随着感染进程逐渐严重,细胞活力下降明显(P 0.001)。感染上调bax、bcl-2、chop、atf4、xbp1s转录水平并且使bax与bcl-2转录水平呈明显拮抗趋势;感染同时上调Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表达和逐级剪切激活;病毒蛋白IE1、UL44可以上调至一个完整的病毒复制周期结束。综上,本研究指出HCMV跨物种感染树鼩原代真皮成纤维细胞可诱导细胞凋亡,并且与内质网和线粒体密切相关。     

三种方法制备的猪小肠黏膜下层支架的生物相容性和免疫原性的对比研究

目的:采用三种不同的脱细胞方法制备小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)支架,研究其生物相容性、免疫原性以及构建真皮替代物等方面,为组织工程化皮肤的细胞载体支架提供优选方案。方法:将新鲜猪小肠分别采用单纯机械法、机械-化学法、机械-酶消化法制备三种不同的SIS,分别作为A、B、C组;通过复合成纤维细胞构建真皮替代物,利用HE染色观察支架组织学形态以及细胞粘附情况、MTT法检测细胞增殖情况,同时观察支架移植SD大鼠皮下1、2、4周后炎症反应及血管化程度。结果:组织学观察A组有细胞残留,B、C组未见细胞残留。MTT结果显示细胞在支架上生长旺盛增殖能力强,其中A组优于B、C组;皮下移植后的HE结果表明B组引起炎症反应较A、C组弱,而C组血管化程度较A、B组更明显。结论:机械-化学法以及机械-酶消化法制备的SIS具有良好的生物相容性以及免疫原性,可作为构建组织工程化皮肤细胞载体的选择。     

真皮间充质干细胞的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一类具有多向分化潜能和高度自我复制能力的组织干细胞,来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSCs最初在骨髓中发现,随后发现在个体发育的其他组织中也存在该细胞。本世纪初有研究者从幼年和成年的啮齿动物皮肤真皮组织中分离得到了干细胞,并称之为皮肤前体细胞。随后,从胎儿、成人、老年供体的真皮结缔组织中得到了有跨胚层分化潜能的MSCs,第一次真正意义上证实了真皮组织中确实存在MSCs,并命名为真皮间充质干细胞(dermis mesenehymal stem cells,DMSCs)。本文就DMSCs的分离、培养、生物学特性及其临床应用前景做一综述。     

脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变和对足部功能的影响

目的:探究脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变的缓解作用和对足部功能的影响。方法:选择本院2017.5-2020.5收治的80例糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者平均分为观察组和对照组2组,其中对照组患者给与常规干预结合下肢动脉腔内治疗,观察组则在对照组的基础上实施脱细胞真皮基质治疗。分析两组患者治疗前后TCSS评分、神经传导速度、足部功能、治疗效果、创面感染发生率、治疗费用以及并发症发生率的差异。结果:治疗后观察组患者TCSS评分和足部功能评分均较对照组低,神经传导速度较对照组快,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者治疗总有效率、患者创面感染发生率和并发症发生率分别为100.00%、2.50%和2.50%,对照组患者则分别为80.00%、17.50%和55.00%,且对照组住院费用较观察组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脱细胞真皮基质治疗对糖尿病足综合征合并下肢动脉硬化闭塞患者神经病变具有确切的缓解作用,尤其对足部功能效果显著,值得临床广泛推广使用。     

脱细胞异体真皮加自体刃厚皮复合移植在创面修复中的护理体会

复合移植术是治疗大面积深度烧伤的方法之一,而与之褶适应的术后护理也很重要。我科自2006年3月采用脱细胞异体真皮＋自体刃厚皮复合移植治疗各种原因引起的烧伤创面和瘢痕切除后继发创面35例,收到满意的效果,现将护理体会报告如下。