表面活性剂的疏水性及电性对肌酸激酶的活力及复性能力的影响

测定了烷基硫酸钠(CnH_(2n+1)SO_4Na;记为CnS;n=8,10,12)和溴化十烷基三甲铵C_(10)H_(21)(CH_3)Br;记为C_(10)NM_3)对肌酸激酶(CreatineKinase;记为C.K.)的活力,以及在它们中变性后复活能力的影响。CnS对C.K.的变性效率随n的增加而增加,变性效率的对数和n之间有线性关系;CnS水C.K.的变性能力远大于C_(10)NM_3;C.K.被C_(10)NM_3变性以后,其复性能力(稀释时恢复活力的程度远大于C.K.被CnS变性后活力的恢复能力。这种差别主要是由于C_(10)NM_3带正电,而CnS带负电引起的。     

甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯及其生物化学特性的研究

本研究工作中,建立了一个有效的甜菜坏死黄脉病毒的分离提纯程序,解决了该病毒粒体易于聚集难以提纯的问题,其操作要点是,(1)通过Sepharose 2B柱层析代替超离心,有效地除去一些小分子量核酸杂质;(2)经PEG再次沉淀浓缩后,调整pH至酸牲(pH3.0),使病毒充分悬浮以减少凝聚;(3)在病毒等电点(pH4.8～4.9)条件下,进一步沉淀以纯化病毒。根据病毒提取物的OD260/OD280比值,算出核酸含量约4.5％。核酸电泳出现4条带,分子量分别为:2.25×10~(?),1.8×10~(?),1.05×10~(?),0.75×10~(?)道尔顿。病毒提取物经超速离心出现4个界面,沉淀系数分别为,200.8S,165S,125.8S,100S。说明甜菜坏死黄脉病毒可能是4组分病毒粒体。病毒粒体含一蛋白亚基,分子量约为2.05±0.05×10~4道尔顿,由16种共199个氨基酸组成。     

青霉素G酰化酶α亚基Ser177的突变对酶活性的影响

用盒式突变和定点突变对大肠杆菌青霉素G酰化酶α亚基177位ser进行了突变研究,结果发现所挑选的突变体均无酶的活力,这一结果可能可以用来解释Ser 177附近肽段和一些青霉素结合蛋白青霉素结合区在一级结构上保持同源性的原因。     

鸡AChRγ亚基基因远端E盒子与myogenin的相互作用

业已证明,鸡ｎＡｃｈＲγ亚基基因５连接区,－５０９／－３０２,－３２４／＋３６片段可独立激活异源启动子ＳＶ４０的转录活性,γ基因近端两个Ｅ盒子（ＣＡＮＮＴＧ）与生肌调节因子（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）的相互作用及转录激活分析表明,近端两个Ｅ盒子是γ启动子活性必不可少的,但却是不充分的,利用胶阻滞和ＤＮａｓｅＩ足级试验观察了鸡ｎＡｃｈＲγ基因远端Ｅ盒子与ＧＳＴ－ｍｙｏｇｅｎｉｎ融合蛋白的相互作用,胶阻滞试验     

HCV C基因在E.coli中的高效表达

本文在基因克隆和序列分析基础上,设计并构建了五种不同的HCV C基因表达工程菌株,研究了影响HCVC基因在E.coli中高效表达的因素。结果表明疏水区编码序列的存在与否对基因表达水平影响较大;翻译通读现象可直接影响目的表达产物的累积水平;不同宿主细胞对外源基因表达水平的影响也同样具有重要意义。通过试验研究,获得了高表达工程菌株,其表达水平达38.5％,为制备高质量重组HCV C抗原并研究其在疾病防治中的作用奠定了基础。     

人肾液泡型H~＋_－ATPase 58kD亚基基因的表达

在大肠杆菌中表达了人肾液泡型Ｈ￣＋－ＡＴＰａｓｅ５８ｋＤ亚基的基因,利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）得到了５８ｋＤ亚基的编码片段．直接将ＰＣＲ产物连接到ＰＥＴ载体上表达．ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析表明５８ｋＤ亚基的基因得到高效表达．表达产物可达细菌细胞质蛋白的５０％．     

嗜热蓝藻优雅粘囊藻藻胆体的特性和别藻蓝蛋白的亚基组成

研究了优雅粘囊藻藻胆体（ＰＢＳ）的特性。从聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）、吸收光谱和二阶导数图谱可证明,它的ＰＢＳ含有一种红色藻胆蛋白,两种Ｃ－藻蓝蛋白和三种别藻蓝蛋白。但是,用ＰＡＧＥ和羟基磷灰石柱层析分离和纯化所得藻胆蛋白,一般仅得到一种Ｃ－ＰＣ和一种亚基组成特殊的别藻蓝蛋白ＡＰＣ。这种ＡＰＣ吸收光谱和荧光发射相同于已报告的ＡＦＣ６６０ｎｍ。但是它的亚基组成是（αα′ββ′）２而不是（α′α２β２β′）Ｌｃ１０或（αβ）３。     

霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建

霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在ＣＴＢ基因（ｃｔｘＢ）３＇端终止密码前引入了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ,构建了质粒ＰＭＣ０５,ＰＭＣ０５中ＣＴＢ与下游ｌａｃＺ＇基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达ＣＴＢ与β－半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与ＧＭ１结合,说明融合蛋白保持ＣＴＢ的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗－ＣＴＢ抗体结合,说明融合蛋     

平菇子实体钙调素的分离纯化及其与猪脑钙调素的生物活性比较

平菇萃取液经酸性沉淀、热变性、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水亲和层析和DEAE-Cellulose 52离子交換层析分冉出了电泳纯的真菌钙调素。在比较钙调素对磷酸二酯酶活化的能力和ELISA实验的免疫亲和力对发现,平菇钙调素与猪脑钙调素的生物活性有较大差异,提示在钙调素定量测定中有必要考虑到标准钙调素与样品钙调素之间的同源性差异。