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我们成功地建立了层析等电聚焦的三步程序,分离提纯葡萄球菌D型肠毒素。首先用CG-50树脂吸附由细菌培养液中获得粗毒素,然后在PBE94柱上进行层析等电聚焦,最后经过Sephacryls-200过滤。纯化的SED纯度约98%,回收率89%,分子量为28500,pI 7.6。Western blot,免疫双向琼脂扩散的鉴定试验表明,纯化SED与其相应抗血清是特异性反应。 相似文献
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昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法 总被引:4,自引:0,他引:4
周先碗 《中国生物化学与分子生物学报》1999,15(2):269-273
谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferases,GST)是一类具有多种生理功能的同功酶.从蜡螟幼虫(Galeriamelonela)的提取液中分离纯化谷胱甘肽S-转移酶的基本方法如下:首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经10000g和100000g分级离心;取上清液通过QAE-SephadexA-25离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析(GSH-QT4),四溴酚酞二磺酸盐-琼脂糖凝胶亲和层析(BSP-QT4),铜离子-琼脂糖凝胶螯合层析(Cu2+-QT4)及PBE94-Sepharose(PBE94)聚焦层析等层析技术进一步分离纯化.将上述方法获得的色谱峰以CDNB和DCNB为底物检测生物活性.具有生物活性部分的蛋白质,通过SDS-PAGE测定其分子量.实验结果表明,采用GSH-QT4亲和层析法获得的活性峰,在SDS-PAGE图谱上呈现出两条带,分子量为24kD,24.5kD左右;Cu2+-QT6螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为24kD左右;PBE94-聚焦层析法分离获得三个活性峰:第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为23kD左右 相似文献
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应用层析聚焦和Oligo(dT)-纤维素亲和层析相结合的方法,从小牛胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)。纯化的TdT聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条区带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量为24,000及26,000d的两条区带。此纯化TdT径戊二醛交联法,自身交联后免疫家兔,得到兔抗小牛TdT的单价抗血清,并进行了免疫学鉴定。 相似文献
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