豚草花粉-屋尘螨混合抗原诱导比格犬哮喘的探索性研究

目的 本研究探索建立症状明显,稳定高效的比格犬哮喘模型。方法 将屋尘螨抗原与豚草花粉抗原配制成单一或混合抗原工作液。健康比格犬在出生后24 h内和第1、4、8周注射混合抗原致敏,第1～12周每天(每日雾化组)或每周2次(间断雾化组)雾化吸入豚草花粉抗原或混合抗原进行激发,第13周起每周1次雾化吸入豚草花粉抗原至第36周。在第36周和第48周进行气道反应性检测、肺泡灌洗液白细胞分类检测和病理分析考察哮喘造模效果。结果 第36周每日雾化组和间断雾化组比格犬气道均出现中性粒细胞炎症、嗜酸性粒细胞炎症和气道高反应性。第48周每日雾化组和间断雾化组的气道嗜酸性粒细胞炎症和每日雾化组的气道高反应性症状仍持续存在。两组比格犬均出现哮喘相关气道重塑现象。结论 使用豚草花粉抗原和屋尘螨抗原的混合抗原对新生犬进行致敏和激发,并加大吸入激发频次,可以建立比格犬哮喘模型。     

盐城地区未成年过敏性疾病患者吸入性过敏原IgE检测结果分析

摘要 目的：通过研究分析盐城地区未成年过敏性疾病患者吸入性过敏原特异性IgE检测结果分布变化特点,为过敏性疾病预防和临床诊疗提供科学依据。方法：自2020年1月至2021年3月期间,选择430例未成年(<18岁)过敏性疾病患者,血清检测方法采用欧蒙公司生产的过敏原特异性IgE检测试剂盒。结果：430例患者中,血清过敏原IgE阳性166例(38.60%),其中尘螨和屋尘是主要的吸入性过敏原。血清IgE阳性率男性39%,女性36% (P>0.05),中学组女性阳性率（61.11 %）高于男性（45.83 %）（P<0.05）。不同年龄组间IgE阳性率有统计学差异（P<0.05）,蟑螂、尘螨、霉菌、豚草、屋尘和年龄组间有统计学差异（P<0.05）。不同临床症状与IgE阳性率有统计学差异(P<0.05),其中呼吸道过敏症状组IgE阳性率最高（48.30 %）,不同症状组间主要过敏原都是尘螨。屋尘阳性患者均合并尘螨阳性,其中70.93 %的患者表现出了呼吸道过敏症状。结论：尘螨、屋尘是盐城地区未成年过敏性疾病患者最主要的吸入性过敏原,研究血清过敏原分布,对未成年人过敏性疾病的预防、诊疗具有重要意义。     

尘螨变应原Derf1核酸序列测定及其分子进化分析

目的:对尘螨主要变应原Der f1进行核酸序列测定,探讨其系统进化信息。方法:根据Genbank公布的Der f1基因序列设计引物,巢式PCR扩增Der f1的cDNA,纯化、回收、克隆至pMD19-T simple后进行序列测定,序列比对后用Clustal W 1.83构建分子进化树。结果:成功扩增出Der f1的cDNA片段,测序表明该基因含ORF1个,长度966bp,与参考序列同源性达99.9%。该变应原具半胱氨酸蛋白酶活性,与果蝇进化关系最远,与梅氏嗜霉螨进化关系最近。结论:成功获得了尘螨变应原Der f1基因片段,根据其编码的氨基酸序列构建出的系统进化树与形态学分类不一致。     

尘螨变应原Der p1浓度与哮喘患者血清螨特异性抗体的季节消长

目的:探讨哮喘患者血清抗体及患者室内尘螨抗原浓度的季节变化规律。方法:2005年9月、2005年12月、2006年3月、2006年6月用ELISA法检测哮喘患者卧室尘样中Der P 1浓度,同步检测患者外周血总IgE、s-IgE、s-IgG1、s-IgG2和s-IgG4。结果:哮喘患者血清总IgE、s-IgE、s-IgG1、s-IgG2和s-IgG4均高于正常对照组,差异均具显著性(P<0.01);比较患者血清总IgE、s-IgE及s-IgG1、s-IgG2、s-IgG4四次检测值,差异均具显著性(P<0.01),患者血清总IgE、s-IgE在12月份检测值最高、6月份检测值最低,s-IgG1以6月份最高、3月份最低,s-IgG4在3月份最高、6月份最低。统计表明,患者卧室Der P1浓度四次检测值差异具有显著性(P<0.01),以2006年3月和2005年12月为高。结论:哮喘患者血清总IgE、s-IgE、s-IgC1、s-IgG2和s-IgG4和卧室尘螨抗原浓度呈季节变化,IgG1的变化与尘螨抗原浓度的变化趋势相反,IgG4的变化与尘螨抗原浓度的变化趋势一致。     

尘螨变应原Der f1 真核表达载体的构建及转染CHO 细胞

目的:构建尘螨变应原Der f1真核表达载体,转染真核细胞并进行蛋白表达.方法:根据Genebank中Der f1基因的核酸序列(AB034946),设计引物,采用PCR法,从保存的JM109工程菌中扩增Der f1编码基因,克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/myc-hisA上,以脂质体法转染CHO细胞,经G418筛选,进行稳定表达细胞株的筛选和鉴定.结果:将目的基因Der f1成功连接到pcDNA3.1/myc-hisA-Derf1并转染CHO细胞,获得稳定表达的CHO细胞株.结论:成功构建了尘螨变应原Der f1真核表达载体,并转染CHO细胞表达蛋白质.     

Morphological observation on adult Dermatophagoides pteronyssinus (Acari: Pyroglyphidae) with scanning electron microscope

[目的]利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus 颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构.[方法]从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征.[结果]SEM照片显示,屋尘螨整肢钳状,须肢扁平;体表具细密皮纹,似指纹状,纹间距小于2 μm.外生殖器位于腹面正中,雌螨为产卵孔,雄螨生殖孔具1对叶状生殖盖.肛 门呈纵行裂孔,雄螨具2个肛吸盘.雌螨足跗节末端各具爪垫1个,雄螨跗节Ⅳ具2个吸盘.[结论]本研究观察结果为尘螨鉴定提供了更多依据.     

山西省晋中市及周边地区螨虫分布状况和优势螨种的研究

目的 研究山西省晋中市及周边地区的尘螨种类和优势螨种.方法 以就诊于晋中市第一人民医院耳鼻喉科门诊的尘螨过敏患者为研究对象,从2009年12月至2011年10月对居住在晋中市及周边地区的30户家庭进行入户采集调查.采集尘样后经过分离,制片,最后进行鉴定.结果 共采集尘样196份,户尘螨占成螨总数的60.1％,粉尘螨占39.8％.通过对不同采集地点的调查结果显示,楼房的样本阳性率为35.8％,平房的样本阳性率为21.8％.通过对不同环境样本中螨密度的统计,枕头的螨密度最高,为166.7头/g.平均螨密度在全年有2个高峰期,分别是7-8月份和12～2月.结论 晋中市及周边地区的主要螨种为麦食螨科的户尘螨和粉尘螨,户尘螨为优势螨种.     

防尘螨药物的实验室药效测试方法

建立防螨药物的药效测试装置与操作方法很有必要。由于尘螨形体微小 ,给防螨药效测试的操作带来诸多困难 ,作者利用螨虫的生物习性及特点 ,建立了布块集螨法、成螨自动分离与净化法、标定计数法 ,布块浸水计数法以及螨虫的驱避和杀灭效果的测试装置与测试方法。结果表明 ,采用成螨自动分离与净化法获得的成螨比例为 ( 94 0± 1 7) %;采用标定计数的精度 (成螨数 刻度 )为 ( 2 0 4± 6 6)只。标定计数 1 0 0 0只螨的实际回收率平均为 ( 75 9± 1 4 6) %,与手工计数无显著性差别 (P >0 0 5 )。实践表明 ,此技术与方法操作简便 ,结果可靠 ,使测试的速度及效果有明显提高     

粉尘螨变应原第7组分全长基因序列测定与分析

目的：获得粉尘螨变应原第7组分编码基因并了解其分子特征。方法：根据GenBank已公布的Derf7核酸序列设计引物,用RT—PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体进行序列测定和生物信息学分析。结果：获得Derf7全长基因约642bp,与参考序列（GenBankAY283292）同源性达99．7％％,仅在249位”A→G”和439位“C→T”发生点突变,含1个完整的开放读码框。推测编码蛋白由213个氨基酸组成,信号肽序列位于1-17aa,亲水性指数为0．031,跨膜区域位于171—190aa,二级结构由一螺旋（57．28％）、延伸主链（6．57％）和无规卷曲（36．15％）组成;亚细胞定位于细胞质,含有N-糖基化位点1个（151-154aa）,蛋白激酶c磷酸化位点1个（193-195aa）,酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点2个（155—158aaand173．176aa）。N端酰基化位点1个（97—102aa）。粉尘螨和屋尘螨变应原第7组分氨基酸序列相似度为86％,二者在螨类第7组分氨基酸序列构建出的分子进化树中聚成一簇。结论：获得了Derf7全长基因,为进一步获得其基因工程制品用于临床和实验研究奠定了基础。     

尘螨过敏原的交叉反应性

尘螨是最主要的室内过敏原之一,随着社会生活的现代化,人们对室内居住环境的要求越来越高,由于环境因素而引起的一些过敏性疾病越来越受到人们的关注。本文主要综述了近几年来尘螨过敏原与其他多种螨类、软体动物（蜗牛）和甲壳类动物（虾）以及昆虫（蟑螂、衣鱼、摇蚊、石蚕蛾）等过敏原之间的交叉反应性,对临床过敏性疾病的诊断具有参考价值。