岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋,４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ,且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同;在２０－４０℃范围内,ＣＤ谱的变化甚微;６０℃时谱峰蓝移;在８０℃或１００℃时,２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时,ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显变化,二级结构单元也有变化,凝集兔红细胞的活性也随之减弱;随脲浓度的增加,ＭＤＬ的谱峰蓝移,最终在２１２ｎｍ处出现大负峰。当胍浓度为０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱即有明显变化和活性丧失;胍浓度继续增加,ＣＤ谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在ｐＨ９．０、温度超过８０℃、脲或胍浓度分别高于２ｍｏｌ／Ｌ和０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱发生显著变化的同时,其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失,分子的二级结构单元也发生很大改变。     

在不同物理化学条件下天花粉蛋白的圆二色性研究

用圆二色谱研究了天花粉蛋白在酸性和碱性溶液中的构象,并观察了在十二烷基磺酸钠(SDS)溶液中天花粉蛋白分子构象的变化,用Chen,Yang与Martinez等人的方法计算了各种条件下天花粉蛋白二级结构含量.结果表明:在很宽广的pH范围内(从pH2到pH12)分子构象基本上是稳定的.但是,在强碱性条件下即pH>12(室温)或pH11.5(40℃)螺旋含量显著减少.在碱性条件下,于250nm附近出现一新的CD带,它的强度与离解的酪氨酸残基个数呈线性关系,说明这一新带主要是由离解的酪氨酸残基产生的.     

蚕豆和玉米叶绿体atpE基因表达产物的生物活性差异及次级结构分析

编码蚕豆和玉米叶绿体ATP合酶ε亚基的atpE基因分别在大肠杆菌中获得了高效表达 ,两种表达的ε亚基蛋白分别与来自蚕豆、玉米和菠菜的缺失ε亚基的CF1重组后 ,发现玉米的ε亚基蛋白在抑制CF1 ATP酶水解ATP、阻塞类囊体膜质子通道以及它促进光合磷酸化等方面均明显地强于蚕豆的ε亚基蛋白。该结果表明 :( 1)ε亚基对ATP合酶活性的调节作用与其同ATP合酶其他亚基间的亲和力大小密切相关 ;( 2 )ε亚基抑制CF1水解ATP和阻塞质子通道两个功能是呈正相关的。圆二色性 (circulardichroism)的分析结果表明 ,玉米CF1ε亚基的 4种二级结构比例为α 螺旋 2 2 .6% ,β 折叠 3 0 .6% ,β 转角 9.3 % ,无规则结构 3 7.7% ;蚕豆CF1ε亚基的 4种二级结构比例为α 螺旋 3 1.4 % ,β 折叠 2 2 .3 % ,β 转角 13 .8% ,无规则结构 3 2 .4 %     

兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型：ＺｎＭＴ－Ⅰ和ＺｎＭＴ－Ⅱ．在酸性条件下脱金属,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析得到脱金属硫蛋白（ａｐｏＭＴｓ）．用圆二色性（ＣＤ）光谱法研究,发现两种亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合依赖于Ｐｂ２＋ 的加入比例及ｐＨ 值．ａｐｏＭＴ－Ⅰ在ｐＨ３～５之间,ａｐｏＭＴ－Ⅱ在ｐＨ４～６之间与Ｐｂ２＋ 结合形成特征簇合物Ｐｂ７ＭＴｓ,其ＣＤ谱图特征峰位于３１６ｎｍ （－ ）,２７０ ｎｍ （＋ ）,２４５ ｎｍ （＋ ）及２２５ ｎｍ （－ ）,提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境．不同亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合方式各不相同：Ｐｂ２＋ 与ａｐｏＭＴ－Ⅰ的结合采取平均分配的方式,而与ａｐｏＭＴ－Ⅱ则为选择性结合方式,表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异．     

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD,从而推断此蛋白为十二聚体,亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示,它的二级结构含有31．7％的α螺旋,23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲,与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知,BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱,其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．     

色氨酸阻遏物与其操纵基因复合物的圆二色性研究

用圆二色性谱来确定色氨酸阻遏物与其操纵基因复合物在溶液中的构象变化。色氨酸阻遏物的圆二色性图谱表明它是一种富含α螺旋的蛋白质,通过比较加入Ｌ－Ｔｒｐ前和后的圆二色性谱,发现活性的与非活性的色酸阻遏物二级结构变化很小,ｔｒｐ Ｐ／Ｏ的圆二色性谱与它的单健、双链理论计算曲线对比,可近拟推测操纵基因在溶液中的存在状态。用色氨酸阻遏物对ｔｒｐ Ｐ／Ｏ进行确定,可以从中找出蛋白质与核酸结合的平衡点。从平衡时     

菌紫质膜对315nm辐照的光反应

利用仪器本身的测量光束３１５ｎｍ光照对紫膜薄膜中菌紫质的光反应的影响的ＣＤ谱研究说明：３１５ｎｍ的近紫外光可以激发薄膜中菌紫质的光反应,３１５ｎｍ与４０８ｎｍ、３３５ｎｍ光激发的光反应变化类型一致,但与５６８ｎｍ光激发的反应变化类型不一致;３１５ｎｍ光激发的光反应与菌紫质的初始样品状态有关,与菌紫质所处的分子状态的分布有关,而不是直接与初始样品状态存在的表现条件有关。结果认为利用包括近ＵＶ光在内的不同光照条件来调控ＢＲ的光反应是有可能的。     

纽带蛋白及其与微丝和膜结合的研究

 用落球粘度计测量低剪切粘度的方法研究了纽带蛋白-肌动蛋白的相互作用。与以前关于纽带蛋白可使肌动蛋白粘度降低并推测它抑制微丝间相互作用的报道不同,10—50μg/ml的纽带蛋白引起肌动蛋白细丝溶液粘度略有增加。电镜观察表明,由于纽带蛋白的作用,肌动蛋白丝聚集成束。 远紫外圆二色谱显示,在pH7.0下,220和207nm处呈双负峰,190nm处有一正峰。按三波长法计算,其α螺旋和β折叠含量分别占41％和22％。研究了pH,磷脂和去垢剂对其构象的影响。疏水性结合的和水溶性的纽带蛋白相比,存在少量构象差别。联系这一蛋白处在细胞骨架与质膜相联系的特殊位置,推测在体内,纽带蛋白与脂结合后也可能发生类似的构象变化。     

蛋白质二级结构的实测与预测

蛋白质二级结构的实测和预测在理论和实践上都有重要意义。常用实测方法为圆二色性,红外及二维核磁共振。讨论了各种圆二色性计算方法的优点和缺陷,介绍了二维核磁共振测二级结构的主要方法,讨论了Chou和Fasman预测法的优劣。建议用多种方法测定并结合预测结果分析,得出恰当结论。