青霉素敏感的酶场效应晶体管的研究和应用

酶场效应晶体管(ENFET)是近年来发展起来的一类半导体技术和生物技术相结合的新型器件。双管差分输出式ENFET对环境温度变化及总体pH变化等外界因素有自动补偿作用,其输出电压随时间的漂移较之单管输出有很大的改善。此外,还可采用金电极作参比电极以实现探头的小型化。青霉索ENFET在0．01mol／L和O．02m01／L的磷酸缓冲液中的响应灵敏度分别为6．5—7．0mV／mmol／L和3．2—3．6mV／mmol／L,线性范围为0．5—14mmol／L和0．5—25mm0l／L。当浸于O．Olmol／L磷酸缓冲液、置于4℃下保存时,探头的贮存寿命大于6个月。探头的累计使用次数可超过1000次。本文还论述了青霉素ENFET在青霉素发酵液浓度 测定中的应用。     

一种纯化细菌有机磷水解酶的简便方法

Cibacron blue T_3GA与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联后,产生一种能有效地分离有机磷水解酶的吸附剂。用0.15mol/L MgCl_2溶液从黄杆菌P3—2细胞抽提出的粗酶液通过柱层析分离,即可得到纯化8倍、酶活性回收率为269.4％的纯酶制品。该酶制品用凝胶电泳测是均一的。     

具有谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌固定化细胞

本文研究了用海藻酸钙包埋法制备含谷氨酸脱羧酶固定化细胞的方法以及研究了制备的条件和影响其制备的因素。该法具有包埋细胞活力回收高,方法简便等优点。比较研究了固定化细胞和自然细胞谷氨酸脱羧酶的一些生物化学性质。其中固定化细胞最适pH和pH稳定性增加,最适温度及热稳定性下降;表观米氏常数增大;二价金属离子Zn~(++)、Cu~(++)、Mg~(++)、Fe~(++),Sr~(++)程度不同的抑制酶活性,Ca~(++)激活固定化细胞酶活性,EDTA无抑制作用。对固定化细胞和自然细胞酶活力活化的研究中发现这两种细胞经蒸馏水保温处理后酶活性都上升,且自然细胞酶活的上升较固定化细胞大;而用底物溶液处理后,自然细胞无变化,固定化细胞酶活下降。     

固定化酶的微环境效应—载体离子基团性质的影响

作者合成了阴离子型和阳离子型葡聚糖,以此为载体,用CNBr活化其剩余羟基,固定化了葡萄糖淀粉酶和葡萄糖异构酶。就离子型载体对固定化酶的蛋白载量、最适pH和热稳定性等的影响做了考察。发现固定化酶的蛋白载量不仅与载体的电性质有关,也与酶分子自身的电性质有关。当载体电性质与酶蛋白电性质相反时,固定化酶的蛋白载量增加,热稳定性提高、载体电性质与酶蛋白电性质相同时,固定化酶的蛋白载量不变或下降,其热稳定性不变。作者还发现当离子型载体孔度和体系缓冲液浓度一定时,酶分子能否进入多孔性载体内部,对其最适pH是否变化影响极大。若酶分子仅被连接在载体的外表层,其最适pH不发生变化,反之亦然。作者还观察到当多糖类载体引入氨基或羧基后,大大增强了其抵抗微生物侵蚀的能力。     

亲和层析法分离腺苷结合蛋白质

本文报告一种新的腺苷亲和层析凝胶的合成方法。利用这种凝胶可从大鼠心脏、肝脏及小牛主动脉平滑肌的水溶部份分离出几种腺苷结合蛋白质,其亚基分子量(据SDS-PAGE)分别为35,000、37,000、46,000、43,000及15,300Dal。现已证明,35,000Dal蛋白质是乳酸脱氢酶及苹果酸脱氢酶,43,000Dal蛋白质是腺苷激酶,46,000Dal蛋白质可能是S-腺苷同型半胱氨酸水解酶。15,000Dal蛋白质前人未有报道。它对腺苷具有高度特导性和亲和力,推测是腺苷的细胞内受体和/或载体。测定了这种低分子量腺苷结合蛋白质的氨基酸组成及某些物理常数:pI=6.5;沉降系数2.42S,微分比容0.727cm~3/g,与腺苷复合物的解离常数K_D=2.3μM。     

金属硫蛋白(Metallothionein)的蛋白质工程

金属硫蛋白(Metallthioneins,简称MTS)是一类广泛存在于自然界,含有丰富半胱氨酸的低分子量蛋白质。它最早(1957)由Margoshes和Vallee从马肾皮质中分离出来,它对金属有很强的亲合力。     

氧化铝为载体的固定化葡萄糖异构酶某些性质的研究

本文报道了以廉价的大孔氧化铝作为葡萄糖异构酶的固定化载体。该固定化酶的热稳定性是60—70℃,如高于70℃就开始失活。最适Ph和温度分别为7．2—8．0和70℃。Gu²⁺、Fe²⁺、Zn²⁺、Mn²⁺和Ba²⁺等金属离子对它的酶活有抑制作用,Co²⁺和Mg²⁺金属离子却有明显的激活作用。该固定化酶酶活是6000—7000μ／g。通过柱运转,它的半衰期为40天以上,转化率是葡萄糖异构为果糖理论值的80一85％。     

牛生长激素结构不均一性的研究

本文报导用常规方法分离纯化的牛生长激素,在还原性SDS-11％聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈分子量很接近的两条主带(22KD,21.5KD)。用单克隆抗体和多克隆抗体亲和层析技术分析了不同分子量形式的牛生长激素的转化,结果表明:牛生长激素可能在pH5.5条件下转化为21.5KD分子,在pH8.3条件下则转化18KD分子。这几种形式的牛生长激素均保留与抗体的结合力,但亲和力不尽相同,如在亲和层析的洗脱性质上存在差异。已检验分离并部分纯化了18KD分子以备作进一步的研究。