SPE-HPLC法分离合欢皮中抗血管新生的活性组分

应用固相萃取-高效液相色谱法(SPE-HPLC),从合欢皮乙醇提取物-正丁醇相中分离得到若干个组分,再用HMEC-1细胞活性检测以及HPLC分析鉴定,筛选得到具有较高抑制新生血管活性的组分II-4(IC50=1.45±0.11μg/mL),且组成较简单。本法简单快速,可以为中药材有效组分的快速分离提供新的方法,也为后续进一步分离得到细胞活性有效单体化合物提供组成比较简单的合欢皮活性组分提取物。     

合欢皮提取物抑制血管生成作用的研究

本文采用体外细胞培养法和体内鸡胚尿囊绒膜模型、荷瘤模型检测合欢皮提取物抑制人微血管内皮细胞(HMEC-1)的增殖、迁移活性,观察合欢皮提取物的抑制血管生成情况。发现合欢皮提取物能显著抑制HMEC-1的增殖(IC50为30μg/mL)和迁移,并且呈明显的剂量依赖性。在体内同时具有抑制鸡胚尿囊膜和肿瘤组织中血管生成的作用。     

合欢皮总皂苷急性毒理学研究

本文采用常规急性毒理学研究的方法探究合欢皮总皂苷对小鼠的毒性剂量。HE染色观察其主要器官形态学变化,玻璃毛细管法测定血液凝固时间,生化法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性。合欢皮总皂苷的最小致毒量为7.5 mg/kg,近似致死量为1500 mg/kg,半数致死量(LD50)为2164 mg/kg。毒性表现为动物活动减少、1500 mg/kg以上剂量使小鼠食欲下降、2250 mg/kg剂量使小鼠体重明显下降;给药后1 d、7 d和14 d给药组血液凝固时间缩短;主要器官形态学明显改变,明显降低主要器官SOD和GSH-PX活性。结果表明合欢皮总皂苷对小鼠有一定的毒性作用。     

合欢皮提取物抑制血管生成的体内药效学研究

为了探讨合欢皮提取物体内对血管生成的抑制作用。本文采用MTT法和Matrigel plug方法考察合欢皮提取物对人血管内皮细胞(HMEC)增殖和体内Matrigel胶小管形成的影响,运用Lewis肺癌转移小鼠模型,观察合欢皮提取物对小鼠Lewis肺癌的疗效。结果表明合欢皮提取物可明显抑制HMEC细胞的体外增殖(IC50为30μg/mL),并且呈明显的剂量依赖性,同时具有抑制Matrigel plug中的血管新生的作用。合欢皮提取物还能够明显抑制Lewis肺癌肿瘤细胞生长,减少转移病灶。提示合欢皮提取物具有明显抑制血管生成的作用,有可能成为有效的血管生成抑制剂。     

合欢皮与山合欢皮的理化性质的比较研究

采用紫外分光光度法,薄层色谱法,溶血试验,泡沫反应等,对合欢皮与山合欢皮的理化性质进行了比较研究。结果表明:可以将山合欢皮作合欢皮使用。     

壳聚糖絮凝法精制合欢皮多糖水提液的工艺

采用壳聚糖对合欢皮总多糖的絮凝纯化工艺进行研究。通过单因素和正交试验,得到优化的工艺条件:壳聚糖用量为生药量0.8 mL/g,絮凝温度35℃,絮凝时间4 h,药液浓缩比(质量体积比)为1∶10(g/mL),在此条件下,多糖保留率、脱蛋白率和多糖纯度分别为91.23%、22.26%和47.27%,优于传统的水提醇沉法。     

合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用研究

目的探讨合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用。方法将60只健康的雄性性成熟昆明小鼠随机分成3个试验组和1个对照组,各试验组小鼠灌胃540 mg·(kg·d)-1,270 mg·(kg·d)-1和135 mg·(kg·d)-1的合欢皮总皂苷水溶液,对照组自由饮水,灌胃1周后按雌雄比2∶1合笼,继续对雄鼠灌胃至19 d,采集雄性小鼠的血液并测定血液生化指标,剖检灌胃雌性小鼠,统计雌性小鼠的怀孕率,测定雄性小鼠睾丸与附睾的脏器系数及附睾精子活力,并固定睾丸和附睾,研究其组织学变化。结果与对照组相比较,雄性小鼠灌胃合欢皮总皂苷后,导致雌性小鼠的怀孕率降低,睾丸脏器系数和附睾精子活率极显著降低(P<0.01),精子畸形率极显著升高(P<0.01)。光学显微镜下,试验组小鼠睾丸和附睾均有一定程度的损失,睾丸生精细胞排列疏松,间质减少,可见曲细精管内有多核巨噬细胞浸润,各级生精细胞脱落。附睾具正常的管腔结构,但能明显观察到管腔内精子几乎消失。结论合欢皮总皂苷对雄性小鼠具有抗生育作用,主要通过影响精子的生成及破坏生精组织而达到。     

合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞体外增殖的影响

研究合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞增殖的药效学影响。采用人脐静脉微血管内皮细胞HMEC-1作为研究模型,经不同剂量合欢皮总皂苷作用48、72 h后,应用SRB法、光学显微镜观察合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞增殖、形态的影响;应用台盼蓝染色法、DNA梯形条带法、流式细胞仪PI单染方法分析合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞生长的影响。实验结果发现合欢皮总皂苷提取物具有抑制血管内皮细胞增殖的作用,其与时间、剂量均存在依赖关系,作用48 h的IC50为1.5μg/mL;合欢皮总皂苷使HMEC-1细胞周期阻滞在亚G0/G1期,高剂量作用48 h后可能引起细胞产生坏死。因此,合欢皮总皂苷可能通过改变细胞周期,部分引起细胞坏死,从而抑制人微血管内皮细胞的增殖。     

合欢皮中抗肿瘤新生血管高效低毒组分的筛选及药效学研究

从合欢皮中提取分离组分1~24,SRB法测定IC50,LDH试剂盒评价毒性,筛选出乙醇回流正丁醇萃取的组分23为抗肿瘤新生血管高效低毒组分,化学定性其主要成分为皂苷,HMEC-1细胞上的IC50为4.18±0.37μg·mL-1,LDH阳性药物浓度为40μg·mL-1。细胞迁移、成管实验表明组分23对细胞迁移、成管均有抑制作用。急性毒性实验测得最小致毒量和最小致死量分别为100 mg·kg-1,4000 mg·kg-1。建立肿瘤小鼠模型进行组分23的体内药效学研究:中剂量4 mg·(kg·d)-1,高剂量组8 mg·(kg·d)-1CD31蛋白标志肿瘤血管数明显降低,低剂量2 mg·(kg·d)-1、中剂量、高剂量组肿瘤细胞凋亡数目显著增高。