反义技术研究进展

过去几年目睹了反义技术的爆炸性发展,文章较全面地评述了反义技术的主要内容和近几年来的研究进展,它们包括几类受人注意的DNA类似物、RNA和Ribozyme.。此外,基于研究现状还展示了反义技术的前景。     

用anti-RNA遏制要不得的基因

anti-RNA——研制者称之为反(anti-)mRNA、反义(anti-sense)RNA、     

Construction and packaging of pseudotype retrovirus containing human N—ras cDNA antisense sequence and its biological effects on human hepatoma cells

N-ras is one of the transforming genes in human hepatic cancer cells.It has been found that N-ras was overexpressed at the mRNA and protein level in hepatoma cells.In order to explore the biological roles of N-ras in human hepatic carcinogenesis and the potential application in control of cancer cell growth,a preudotype retrovirus containing antisense sequence of human N-ras was constructed and packaged.A recombinant retrovirus vector containing antisense or sense sequences of N-ras cDNA was constructed by pZIP-NeoSV(X)1.The pseudotype virus was packaged ang rescued by transfection and infection in PA317 and ψ 2 helper cells.It has been demonstrated that the pseudotype retrovirus containing antisense N-ras sequence did inhibit the growth of human PLC/PRF/5 hepatoma cells accompanied with inhibition of p21 expression,while the retrovirus containing sense sequence had none.The pseudotype virus had no effect on human diploid fibroblasts.     

反义寡核苷酸片段可抑制鲫鱼视网膜电压依赖性钾离子通道的表达

爪蟾卵母细胞经注射鲫鱼视网总ＲＮＡ后,可表达大量电压依赖性钾离子通道。在此基础上,我们进一步发现,一个特定序列的寡核苷酸能专一地抑制该通道的表达。由于我们设计与合成的该片段与果蝇、小鼠中已克隆的钾通道中编码Ｎ端的一个多肽的ｍＲＮＡ完全互补,因此推测：鲫鱼视网膜中的Ｋ这个区域与其它物种的Ｋ通道有高度同源性,这为克隆该基因和研究它的功能提供了重要资料。     

反义RNA技术在植物基因工程领域中的应用

反义RNA技术在植物基因工程领域中的应用包括：a．番茄和其他水果的成熟控制;b．植物的抗病性;c．改变花卉的颜色;d．植物淀粉合成的控制;e．油料植物种子中脂肪酸合成的控制;f．杂交种子生产中雄性不育性的控制;g．其他.     

植物反义寡核苷酸的研究进展

本文介绍了近年来植物中反义寡核苷酸的研究现状,它包括反义ＤＮＡ、反应ＲＮＡ和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ。反义寡核苷酸能特异地拮抗内源或外源基因表达,这为研究某特定基因功能提供了更有效的方法,此外也为培育抗病植株,建立植物反向筛选系统,次生代谢调控及农艺性状改良提供了可能途径。     

miRNA-21种子序列反义核酸及抗多发性骨髓瘤应用

成熟microRNA的种子序列通过与其靶mRNA的3'-UTR区完全互补结合,发挥负性调节作用.针对miR-21的种子序列设计并合成8个碱基的微小反义核酸(tiny anti-miR-21,t-antimiR-21),研究t-antimiR-21对多发性骨髓瘤的抑制效应.利用LipofectamineTM2000转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞系,激光共聚焦显微镜检测荧光标记的反义寡核苷酸的细胞内定位,流式细胞仪检测转染效率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测细胞增殖抑制率;台盼蓝拒染法测活细胞数;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示:t-antimiR-21主要定位于细胞质,与antimiR-21具有相同的转染效率,但是t-antimiR-21转染后降解较快.t-antimiR-21显著抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,最佳作用浓度为0.4μmol/L,最佳作用时间为48 h.结果表明t-antimiR-21可用于血液系统相关肿瘤的实验治疗,miRNA-21可作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点.     

反义长链非编码RNA与基因表达调控

反义长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类与其它转录物序列互补的内源性lncRNA。它们通过转录抑制、染色质重塑、核内RNA-RNA相互作用和胞浆RNA-RNA相互作用等机制,在转录及转录后水平调控靶基因的表达。反义lncRNA参与了X染色体失活、基因组印记及一些疾病的发生和发展过程,有希望成为疾病治疗的新靶点。