姜老师信箱

蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是蛋白质研讨班的学员,我的课题是纤维素酶,上您的课收获很大,因为发现自己有好几步实验都做的不正确。在此我想咨询您几个问题:1.我只需要将纤维素酶脱盐、脱水浓缩,选用硫酸铵沉淀,之后透析的方法是否正确?有没有更好的方法?     

金丝桃苷双水相提取工艺研究北大核心CSCD

以鹿蹄草为原料,利用微波双水相辅助提取技术进行提取,在单因素实验的基础上对提取条件进行了考察,根据BBD(Box-Behnken Design)实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,以鹿蹄草中金丝桃苷(hy-perin)为指标,对提取过程进行优化,得到最佳工艺参数为:提取温度50℃,液固比36∶1,(NH4)2SO4浓度22%,提取时间22 min,微波功率300 W,提取次数3次。在最佳提取条件下,金丝桃苷的提取率可达0.982 mg.g-1,纯度可以达0.443%。     

高速逆流双水相色谱法纯化卵白蛋白

生物大分子的液_固色谱纯化过程中固相载体会产生产物吸附、变性等不良影响。高速逆流色谱无需固相载体 ,且具有高分便率和高回收率的优点 ,其中有机相 水相体系在分离天然产物中应用广泛 ,而应用双水相体系分离生物大分子尚处于研究阶段。双水相高速逆流色谱体系的建立与仪器设备及操作工艺条件密切相关 ,因此利用多分离柱高速逆流色谱仪 ,研究了PEG1000-无机盐双水相体系对标准蛋白质混合物以及卵白蛋白的分离。pH值和PEG浓度对不同种类蛋白质的分配系数影响不同 ,实验发现在pH9.2的150% (W/W)PEG1000 170% (W/W)磷酸钾盐体系中 ,细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白的分配系数差异较大 ,且分布合理 ,因而采用该体系在 0 8mL min流速 ,85 0r min转速的条件下 ,成功分离了细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白的混合物。实验也发现在pH9 2的 16 0 % (W/W)PEG10 0 0 17 0 % (W/W)磷酸钾盐体系中 ,鸡蛋清样品中的主要蛋白质成分:卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系数差异最大 ,因而采用该体系在 1 8mL min流速、85 0r mi转速的条件下,200min内从鸡蛋清样品中成功分离卵白蛋白,其电泳纯度为100%,收率为95%.     

同柱串联凝胶过滤从重组人肿瘤坏死因子中脱除PEG和盐

rhTNF-α是一种具有较强抗癌活性的蛋白质,因此近年来人们对它的提取和分离纯化做了大量工作[1,2].破碎萃取联合操作是对双水相萃取和珠磨法破碎的发展和集成.它的出现给rhTNF-α粗提开了一个好头.经双水相萃取后,上相大量的PEG及盐保护了同样处于上相的rhTNF-α的活性[3].但大量PEG及盐的存在使样品很难用层析来进一步纯化.     

双水相-微波提取苎麻皮中总黄酮及抗氧化性研究北大核心CSCD

在乙醇-硫酸铵双水相体系中,以苎麻皮为原料,采用微波法提取苎麻皮中的总黄酮。通过单因素实验考察了乙醇浓度、料液比、硫酸铵用量、提取功率、提取时间对提取率的影响。用正交试验确定了最优提取条件,即在料液比1:50 g/mL、硫酸铵用量为0.2 g/mL、提取功率为200 W、提取时间为120 s,乙醇体积浓度为70%时提取率可达2.442%。采用了水杨酸法和邻苯三酚自氧化法对黄酮抗氧化性进行了研究,结果表明苎麻皮黄酮对O-·2和·OH具有较强的清除作用。     

白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取

本文研究了不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/（NH4）2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、（NH4）2SO4浓度、离子强度、pH值及（NH4）2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化了实验条件,初步确定在PEG浓度15%,（NH4）2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3 U/mg蛋白。     

双水相同时提取次烟叶中茄尼醇和烟碱的研究

研究新型双水相体系同时从次等烟丝中提取茄尼醇和烟碱的可行性和工艺条件。新型双水相体系为丙酮-磷酸氢二钾双水相体系,主要研究了丙酮与水不同体积比、磷酸氢二钾的加入量、料液比、浸提温度、浸提时间、双水相体系pH值对茄尼醇和烟碱得率的影响,确定了最佳提取条件:丙酮与水的体积为5∶5,磷酸氢二钾的加入量为3.0 g,料液比为0.025 g/mL(0.5 g/20.0 mL),浸提温度为50℃,浸提时间为4 h,pH值为10。     

双水相系统纯化山楂叶中黄酮类物质的研究

应用水、乙醇和硫酸铵三者形成双水相系统,并利用黄酮在乙醇中的溶解度要大于水中的溶解度,以脱除其中一些易溶于水和在高浓度乙醇中溶解度低的物质。尝试了不同盐、不同体积比的乙醇和水、以及盐加入量对分相的影响并测定了其在不同情况下的纯化效果。发现在硫酸铵中的分相情况最好,在加入量到2．5g时既可以达到分相完全。并测定：（1）在5mL乙醇＋5mL水＋5g硫酸铵＋0．15g粗体物（粗体物中黄酮的百分含量为25％）的双水相中,黄酮类物质的回收率为89．2％,而黄酮百分含量提升为47．6％;（2）在4mL乙醇＋5mL水＋5g硫酸铵＋0．15g粗体物（粗体物中黄酮的百分含量为25％）的双水相中,黄酮类物质的回收率为81．9％,而黄酮含量提升为50．9％。水、乙醇和硫酸铵三者形成双水相系统应用于山楂叶中黄酮类物质的纯化在文献中少有报道,而本文应用此法可以将黄酮含量从25％提升到将近47．6％,并且回收率为89％。     

双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的研究

建立了由高分子化合物聚乙二醇(PEG4000)与葡聚糖40000(D40)形成的双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的新方法.考察了萃取体系相图,研究了PEG4000/D40质量分数、样品溶液加入量、pH值和温度等因素对双水相成相及桃叶珊瑚甙萃取率的影响.结果表明:PEG4000的质量分数为11%,D40质量分数为8%、样品溶液加入量为8 g,温度为60℃,溶液pH为7时,双水相体系对桃叶珊瑚甙有较高的萃取率,重复三次可达到66.32%,而且萃取得到的桃叶珊瑚甙产品的纯度达到48.67%,远远高于粗提物中的8.750%.