双峰驼凝乳酶原基因的生物信息学分析

通过生物信息学的方法对双峰驼凝乳酶原基因及相应的氨基酸序列的同源性、理化性质、保守结构域、亚细胞定位、信号肽、跨膜结构域、亲水性/疏水性、二级结构进行预测分析.结果表明,双峰驼凝乳酶原基因开放阅读框全长1 146 bp,编码381个氨基酸,属于胃蛋白酶A超家族,预测定位于内质网（膜）的稳定亲水性蛋白,具有一个16个氨基酸的信号肽,其不含跨膜结构域.无规卷曲是其二级结构中最大量的结构元件,α螺旋和延抻链分散于整个蛋白质中,活性位点的分析表明,编码蛋白有6类活性位点.分析双峰驼凝乳酶原基因及其编码蛋白质的特征,能够为深入开展双峰驼凝乳酶的表达和凝乳特性研究提供理论依据.     

复合凝乳酶对功能性消化不良儿童营养状态和摄食行为的影响

目的:观察复合凝乳酶胶囊对不同亚型功能性消化不良儿童临床表现、营养状态和摄食行为的影响及安全性。方法:以2017年8月至2018年9月在湖北省妇幼保健院儿童消化内科就诊的功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)儿童为研究对象进行问卷调查,观察治疗前和复合凝乳酶治疗2 w后患儿临床症状变化及药物相关不良反应的发生情况,监测患儿身高和体重,进行膳食情况的调查。结果:共163例儿童纳入研究,发生餐后不适综合征(Postprandial distress syndrome, PDS)66例,上腹痛综合征(Epigastric pain syndrome, EPS)97例。治疗前,PDS组儿童症状总分明显高于EPS儿童(6.9±2.7 vs 3.6±1.7,t=5.90,P=0.00)。PDS组儿童WAZ、WHZ、HAZ、身高别体质量Z值(weight for height Z score,WHZ)、年龄别身高Z值(height for age Z score,HAZ)、年龄别体质量Z值(weight for age Z score,WAZ)、体质量指数(body mass index,BMI)、膳食多样化分数(Dietary diversity score, DDS)均明显低于EPS组(P均0.05)。治疗2 w后,PDS儿童症状总分明显降低(P=0.00),改善程度依次为:厌食早饱腹痛嗳气恶心腹胀。EPS儿童症状总分无明显变化(P=0.11)。PDS儿童WAZ、WHZ、DDS均有明显升高(P均0.05)。EPS儿童DDS无明显变化(t=0.22,P=0.30)。研究期间未见明显药物相关不良反应。结论:复合凝乳酶胶囊可改善PDS患儿的临床症状、营养状态和膳食多样性,且安全性高。     

牛凝乳酶基因在毕赤酵母中的重组表达

通过PCR技术从克隆载体pMD18T-Prochy上扩增牛凝乳酶原基因,双酶切后定向插入到酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-Prochy,线性化后电转化毕赤酵母GS115,经PCR和测序鉴定凝乳酶原基因成功插入到毕赤酵母的基因组中。在甲醇诱导下进行凝乳酶的表达,SDS-PAGE分析证明重组凝乳酶的分子量约为37 kD,培养基上清液中凝乳酶的活性为12.2 SU/mL。本研究首次应用毕赤酵母表达牛凝乳酶,在培养基中获得分泌表达的重组凝乳酶,为干酪工业提供了新型及优良的凝乳酶来源。     

微小毛霉凝乳酶的生物合成和性质的研究

从19株真菌中筛出一株徽生物凝乳酶高产菌株,微小毛霉(Mucor pusillus)602。在含有50—60％麸皮的半固体培养基中、起始pH 5．0-6．7,28℃,培养96小时,凝乳酶最高活力为17 000u／g麸皮。补加葡萄塘、蔗糖、硫酸铵、乳清粉均对酶的产生无显著影响。酶的凝乳活力与蛋白水解活力作用的最适温度均为65℃,此酶具有较高的凝乳活力对蛋白水解活力的比值,凝乳酶的pH意定范围为4-8,凝乳酶在60℃保温5分钟,活力完全丧失。以上性质对于干酪的制造是有利的。     

在欧洲会议上宣布了酶方面的新发展

<正> 1984年5月10日和11日在丹麦的巴斯韦尔召开了Novo生物技术讨论会,同年由Online Conference组织召开了“欧洲生物技术会议”,1984年5月15—17日在伦敦也召开了有关生物技术的会议,这些会议都反映了当前酶生产和应用方而的最新进展和趋势。下面是这些会议论文的要点。根据威斯康辛大学的Thomas Brock发言,分离嗜热微生物和所包含的热稳定性酶的关键,是探索接近于目标酶理想作用温度的环境。在丹麦会议的发言中,Brock指出:从生长     

液态型凝乳酶储藏条件的初步研究

为进一步延长液态型凝乳酶的储藏时间,以金属离子、糖类、多羟基醇、大分子助剂和表面活性剂等为稳定剂优化得到最优的复合保护剂配方:山梨醇7.5%、明胶1%、甘油15%、吐温400.25%、氯化钾50 mmol/L;添加0.1 g/L对羟基苯甲酸乙酯可有效抑制在储藏过程中由杂茵繁殖导致的发臭、浑浊。添加复合保护剂和防腐剂的液态型凝乳酶,室温放置90 d,凝乳酶活力保留率为80.8%,比对照组提高41.6%。     

凝乳酶原(凝乳酶)二硫键Cys206-Cys210的定位突变

在对凝乳酶原二硫键Cys206\|Cys210进行定位突变过程中发现,在相应的模板序列中有自身形成自由能为-16.1kcal/mol的茎环结构倾向,妨碍与引物结合,从而难以合成突变的DNA,采用快退火可解决此矛盾。5个突变基因均能在大肠杆菌中高效表达,除C206A外,约占细胞总蛋白的50%左右。突变体的复性结果表明,Cys206\|Cys210对凝乳酶原正确折叠不是绝对必需的,但相应位置的氨基酸取代对复性效率有显著影响,在5个突变体中,C206A/C210A的复性率分别为C206S/C210S\,C210A\,C210S的4.5倍、20倍和30倍,而C206A完全不能复性。C206A/C210A与C206S/C210S的远紫外CD光谱与野生型基本相同,其荧光发射光谱与野生型相比最大发射峰不变,而荧光强度有显著增加。由于上述3个蛋白具有相同比活,说明突变分子能形成具有生物活性的空间构象,而只是某些色氨酸残基微环境受到微扰。     

微生物凝乳酶的研究 Ⅱ.酶学性质

从2502株菌中筛选到一株真菌Y85-8512经诱变育种,发酵物的凝乳酶活力为5000 u/g以上。对该酶的酶学性质进行了研究,其最适反应温度为70℃,酶在50℃保温半小时稳定;pH 5.0时酶活最高,pH 7.0酶几乎失活;pH 2—5,室温保持1小时,剩余酶活力为66—100%。该酶凝乳活性与水解蛋白质活性之比为4782。还与胃蛋白酶、小牛凝乳酶及毛霉凝乳酶进行了比较,初步认为该酶不同于这几种酶。