流行性感冒病毒重组株京生75-29 R2 T1及冷适应株31-广的基因分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析了流行性感冒病毒重组株京生75-29R2 T1(H3N2)及冷适应株31-广(H3N2)的RNA及多肽。重组株京生75-29R2 T1的HA及M基因系来自流行病毒亲本株/甲/北京/29/75(H3N2),而P_2、NA、NP及NS基因则来自温度敏感母株福R3(H2N2)。流行病毒株甲/穗/03/68(H3N2)在低温条件下经鸡胚尿囊腔传递24代而获得的冷适应疫苗毒株31-广(H3N2)其基因型与野毒株一致。     

甲型流感病毒自然温度敏感株的宿主依赖性

用鸡胚细胞(CEC)和Madin-Darby Canine Kidney(MDCK)两个宿主细胞系统,检查甲型流感病毒各亚型不同时期流行株的温度敏感性状(ts),发现自然界存在许多宿主依赖的温度敏感性突变株(hd-ts)。它们在CEC上是ts,在MDCK上却是ts~ 。检出的hd-ts株中有些曾经过人体接种观察证明为减毒株。这表明在CEC中鉴定的ts表型与对人减毒性状密切相关。     

甲型流感病毒免疫治疗S_（37）腹水瘤的实验研究

用甲型流感病毒７５－３９株鼠肺适应型,免疫治疗Ｓ３７腹水瘤小鼠,存活率达９３．３％。体外流感病毒感染Ｓ３７肿瘤细胞,经不同时间观测,到３天时Ｓ３７细胞经胎盘蓝染色发现细胞１００％死亡。而对照组Ｓ３７细胞死亡率为１０％左右（ｐ＜０．０１）。进一步研究病毒免疫治疗Ｓ３７腹水瘤小鼠的机理,发现经病毒感染后小鼠ＮＫ细胞杀伤活性升高达５８％,正常鼠ＮＫ活性为２２％,两者有显著性差异（ｐ＜０．０１）。另外,检测病毒注射后小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性也随之升高。     

气相色谱法检测水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜残留量

目的 建立测定水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)残留量的气相色谱法,并进行方法学的验证和初步应用。方法 采用气相色谱法检测,对色谱柱、柱温、分流比以及供试品预处理方法进行了优化,并对优化后的方法进行系统适用性和专属性、线性和范围、准确度和精密度、定量限和检测限、耐用性的方法学验证。结果 色谱柱使用DB-624(30 m×0.53 mm, 3.00μm)毛细管柱,以氮气为载气,进样口温度设定为250℃,FID检测器温度设定为270℃,柱温为120℃,分流比为5∶1。供试品在检测前采用乙腈沉淀蛋白的预处理方式(体积比1∶9～1∶19)以去除其中的干扰杂质。方法学验证结果显示,系统适用性和专属性良好,DMSO色谱峰与杂质分离良好,在50～1 000μg/mL范围内线性关系良好(R²=0.999 9)。检测限为20μg/mL,定量限为50μg/mL;准确度结果均在90%～110%之间,精密度的RSD均<10%。水痘减毒活疫苗原液中的DMSO残留量均未检出。结论 建立的气相色谱法能稳定、准确、快速地检测水痘减毒活疫苗原液...     

非编码RNA调控流感病毒复制的作用及相关机制研究进展

流感病毒是一种重要人畜共患病,严重危害人类健康和畜牧业发展。A型流感病毒（Influenza A Virus, IAV）在宿主细胞内的复制受到多种因素的影响和调节,近年来的研究证明,非编码RNA(ncRNA),包括miRNA、LncRNA、CirRNA等,在流感病毒复制过程中起到重要的调控作用。ncRNA调控流感病毒复制有直接途径和间接途径两种,其中直接途径为直接作用于病毒的vRNA或mRNA,在转录或翻译水平影响病毒的复制。间接途径为作用于细胞内不同的信号通路,通过影响细胞因子合成、诱导宿主细胞凋亡、引起细胞自噬反应等途径,影响病毒的复制。通常情况下,由宿主编码的ncRNA能够抑制病毒的复制,而由病毒编码的ncRNA能够减弱宿主细胞的抗病毒反应,促进病毒复制。通过总结和梳理近年来关于ncRNA调控流感病毒复制的研究,我们发现ncRNA能够作为调控增强宿主细胞抗病毒免疫、下调病毒转录和翻译的工具,有望开发成为抗流感病毒靶向药物。后续的机制研究应不局限于某一种或几种ncRNA的作用,而应在ncRNA在宿主细胞内的分泌机制、调控的分子网络等方面进行深层次的探究。     

11种灭活型样本保存液对病毒核酸保护效果的比较

收集11种不同厂家的灭活型样本保存液,将甲型流感病毒加入保存液和生理盐水中,在4℃、25℃和37℃条件下保存0 h、2 h、4 h、6 h和24 h后,分别提取各组的病毒核酸,并通过逆转录实时荧光PCR检测病毒载量变化,以探究不同样本保存液对病毒核酸保护效果是否存在差异。结果发现不同样本保存液中的病毒载量随保存时间和温度变化存在显著差异。据此可将11种灭活型样本保存液的保存效果分为四类：(1)优秀产品：在任一温度（4℃、25℃、37℃）条件下,即使保存24h时病毒核酸都未发生明显降解,占比27.2%(3/11);(2)良好产品：低温（4℃）和室温（25℃）情况下核酸未出现降解,但在高温（37℃）条件下6 h后保存效果明显下降,占比27.2%(3/11);(3)合格产品：低温（4℃）条件下对病毒核酸具有较好的保护效果,但在室温（25℃）和高温（37℃）情况下随保存时间延长其保护效果显著下降,占比18.1%(2/11);(4)不合格产品：任一保存条件下对病毒核酸的保护效果都较差,甚至加入病毒后立即导致病毒核酸发生快速降解,占比27.2%(3/11)。以上结果说明不同厂家样本保存液对病毒核酸...     

蛋白质泛素化修饰对流感病毒增殖和致病性的影响

流感病毒是一种全球流行的呼吸道病原体,在其与宿主相互作用的过程中,病毒运用各种各样的方法逃避宿主抗病毒免疫系统的追击,而同时宿主也在不断武装自身免受病毒入侵,在这一系列过程中,泛素系统作为能够通过单个泛素或可逆性的泛素链与靶蛋白连接,进而使靶蛋白激活或失活的一种翻译后修饰机制。泛素化修饰在流感病毒复制过程中起到了至关重要的作用。因此,本篇综述结合近些年在此研究领域的研究成果,阐述了泛素化修饰参与病毒-宿主之间相互作用的机制,并为今后抗病毒药物的研发提供一个新的思路。     

口服霍乱活疫苗的创制

基因重组技术最有希望的页献之一是生产新的更有效的疫苗。在本期“生物工程”,疫苗发展中心(CVD,巴尔的摩马里兰大学医学院)的J.Kaper和其同事叙述了这一设想及作为口服活霍乱疫苗的弱化霍乱弧菌的创制。弧菌引起的腹泻在许多发展中国家是婴儿死亡的重要原因,尽管努力试验了多年还没有可供使用的理想疫苗。