HMGB1 siRNA对HT-29细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察干扰HMGBl表达对HT-29细胞侵袭转移能力的影响。方法：HMGB1siRNA通过脂质体转染HT-29细胞,westernblot和实时定量RT—PCR检测HT-29细胞中HMGB1蛋白和mRNA的表达,Transwell小室观察HT-29的转移侵袭能力。结果：干扰HMGBl后HMGB1蛋白和mRNA的表达均减少,HT-29的转移侵袭能力下降。结论：HMGB1能促进HT-29的转移侵袭能力,干扰其表达可抑制HT-29的转移侵袭。     

ID1对大鼠C6细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察IDl对大鼠胶质瘤细胞（c6细胞）侵袭转移能力的影响。方法：以C6细胞为研究对象,ID1 siRNA通过脂质体转染c6细胞,western blot检测C6细胞中ID1、P-NF—KBp65蛋白的表达、Elisa法检测细胞培养上清MMP．9的含量,Transwell小室观察成的转移侵袭能力。结果：干扰ID1后能显著降低C6细胞中P-NF-KBp65蛋白、细胞培养上清中MMP-9的含量（P〈0．01）,降低C6细胞的转移侵袭能力（P〈0．01）。结论：干扰ID1能抑制C6细胞的转移侵袭,其机制可能与抑制C6细胞中P-NF-K Bp65蛋白、MMP-9的表达有关。     

ID1对大鼠C6细胞侵袭转移能力的影响

目的:观察ID1对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)侵袭转移能力的影响。方法:以C6细胞为研究对象,ID1siRNA通过脂质体转染C6细胞,westernblot检测C6细胞中ID1、P-NF-КBp65蛋白的表达、Elisa法检测细胞培养上清MMP-9的含量,Transwell小室观察成的转移侵袭能力。结果:干扰ID1后能显著降低C6细胞中P-NF-КBp65蛋白、细胞培养上清中MMP-9的含量(P<0.01),降低C6细胞的转移侵袭能力(P<0.01)。结论:干扰ID1能抑制C6细胞的转移侵袭,其机制可能与抑制C6细胞中P-NF-КBp65蛋白、MMP-9的表达有关。     

志贺菌毒力检测的常用方法

志贺菌属的细菌以人类为特异性宿主,感染人类肠上皮细胞,多导致痉挛性腹痛、腹泻、发烧等症状,是细菌性痢疾最为常见的病原菌。志贺菌的致病机理主要由其Ⅲ型分泌系统调节。志贺菌侵袭力的高低及毒力强弱决定了其致病性的强弱。我们简要介绍志贺菌属细菌的毒力检测方法。     

减毒鼠伤寒沙门菌体内定位分析…

分析减毒鼠伤寒沙门菌口服感染后在小鼠体内定位的情况.将构建的红色荧光蛋白(RFP)原核质粒pYA33-DsRed,以电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550,重组菌命名为X4550(33-DsRed).重组菌分别感染巨噬细胞RAW264.7和骨髓源树突状细胞(BMDC),并用流式细胞术检测红色荧光细胞荧光强度.此外,以不同剂量重组菌口服免疫BALB/c小鼠,并于免疫后1d、2d、3d、5d、7d取小鼠脾、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、派伊尔氏结(PP)、腹股沟淋巴结(ILN)细胞,检测各组织器官中的红色荧光阳性细胞百分率.重组菌对RAW264.7细胞和BMDC均具有良好的侵袭力.口服小鼠后,第1d,仅在MLN及PP中检测到RFP阳性细胞,其中PP中阳性细胞达到1.4%;第2 d,在ILN中达到0.4%;第3 d,各个组织器官中RFP阳性细胞均有上升趋势,此时在脾、肝中也检测到RFP阳性细胞.第5 d,RFP阳性细胞均减少,第7 d则未检测到任何RFP阳性细胞.减毒鼠伤寒沙门菌具有良好的侵袭力,其黏膜移行方式以及对免疫组织器官靶向定位性,在优化黏膜疫苗以及提高疫苗免疫效力等方面都具有重要作用.     

重组质粒在减毒沙门氏菌中的稳定性及其对细菌侵袭力的影响

将含有外源基因的重组真核表达质粒pcDNA3-F和pCI-F转化减毒鼠伤寒门氏菌,探讨质粒类型和插入片段对重组质粒在细菌内的稳定性和细菌侵袭力的影响。结果表明,外源质粒可降低减毒沙门氏菌在体外的增殖能力和侵袭力,也影响细菌在鸡体内的存活力;就质粒类型而言,pCI的影响大于pcDNA3,而以携带外源基因的重组质粒影响较为显著;外源基因插入也影响质粒在宿主菌内的稳定性。提示利用减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗研究时,要考虑质粒类型与其在宿主菌内稳定性的关系、携带外源基因重组质粒对载体菌侵袭力和存活力的影响等问题。     

大肠癌细胞分泌的β—葡萄糖醛酸苷酶与其侵袭力关系的研究

以Fischman法检测了6种培养的人大肠癌细胞系分泌至培养液的β-葡萄糖醛酸苷酶活力。结果显示高侵袭力细胞系分泌的该酶活力显著高于低侵袭力细胞系,提示培养的人大肠癌细胞分泌的β-葡萄糖醛酸苷酶水平可作为判断其侵袭力高低的有用指标。     

卵巢癌细胞中RhoA和NF-κB表达与癌细胞增殖、侵袭能力的关系

目的:探讨卵巢癌细胞中RhoA和NF-κB表达与癌细胞增殖、侵袭能力的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞A2780、SW626、Skow3和正常卵巢上皮HOSEA中RhoA和NF-κB的表达;MTT法测定A2780、SW626、Skow3的增殖能力;Transwell小室体外侵袭实验检验细胞侵袭能力。结果:三种卵巢癌细胞中RhoA与NF-κB的表达无差异,但均高于正常卵巢上皮HOSEA中表达(P0.05);MTT实验结果显示在24 h、48 h、72 h、96 h、120 h时间点,过表达RhoA组和NF-κB组吸光光度值大于对照组(P0.05);RhoA转染后,A2780、SW626、Skow3、HOSEA 4种细胞的穿膜细胞数测值分别是33.56±12.42、56.21±9.53、25.53±11.89、0,说明SW626侵袭力最强,HOSEA无侵袭力(P0.05),不同细胞间侵袭力存在差异,且具有统计学意义(P0.05)。NF-κB转染后,A2780、SW626、Skow3、HOSEA 4种细胞的穿膜细胞数分别为22.53±12.57、33.90±10.12、45.91±9.02、0,其中穿膜细胞数最多的是Skow3细胞,不同细胞间穿膜细胞数比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:卵巢癌细胞中RhoA与NF-κB表达增加,可增强细胞增殖能力,并使细胞具有侵袭性。     

宋内氏福氏2a双价志贺氏菌芳香族氨基酸营养缺陷型减毒株的研究Ⅱ:生物学特性的研究

进一步对FS54—2、—3、—4、—5、—6、—7及—7b等双价减毒株的侵袭力、毒力、免疫原性与免疫保护性及遗传稳定性等进行了研究,证明双价减毒株仍保持了入侵肠上皮细胞的能力;小动物实验安全低毒;有很好的免疫原性,对小鼠有很好的双重免疫保护性。     

应用改良庆大霉素保护试验检测肠炎沙门氏菌侵袭力表型

肠炎血清型沙门氏菌(Salmonella enterica serovar Enteritidis,SE)是引起肠炎和全身感染重要的沙门氏菌血清型之一,了解沙门氏菌侵袭力表型对阐明其感染致病机制至关重要。传统庆大霉素保护试验(GPA)存在通量低、重复性差等缺点。文中利用96孔细胞培养和多孔道移液的高通量优势,结合菌落分区微量滴板计数法改良了传统GPA试验方案。应用改良的GPA方法检测了16株SE菌株对非吞噬细胞(HT-29)的入侵表型和43株SE菌株对吞噬细胞(RAW264.7)的胞内复制表型。通过比较分析SE强、弱菌株JL228和LN248对吞噬细胞(RAW264.7)的侵袭力表型发现,改良的GPA得出的数据组内和组间变异系数低、数据重复性强,胞内复制表型也与显微观察结果相符。通过实践应用发现,改良的GPA方法具有通量高、重复性强、结果可靠兼具省时、省力等优点,可作为沙门氏菌菌株侵袭力表型检测的更新方案,为进一步阐明其致病机制提供了更科学有效的方法。