小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化

旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞( mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞.利用RTPCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA (6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC.从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确.采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)％.经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中.成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3:10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆.为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞.     

AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的影响因素分析及其预测模型构建

摘要 目的：探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的影响因素,并构建预测模型。方法：回顾性选择2021年1月至2022年12月内蒙古自治区人民医院收治的AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者177例,根据营养风险筛查2002（NRS2002）评分将患者分为营养风险组（122例）和无营养风险组（55例）。单因素和多因素Logistic回归分析AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者营养风险的影响因素,并根据回归模型构建预测模型。受试者工作特征（ROC）曲线验证预测模型的预测效能。结果：单因素分析显示营养风险组年龄大于无营养风险组（P＜0.05）,COPD病程长于无营养风险组（P＜0.05）,慢性胃病,急性加重次数≥3次/年,改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷（mMRC）评分3-4级比例高于无营养风险组（P＜0.05）,第1秒用力呼气容积（FEV₁）、FEV₁/用力肺活量（FVC）,体质量指数（BMI）,白蛋白、前白蛋白,握力,氧分压（PO2）低于无营养风险组（P＜0.05）,中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值（NLR）,慢性阻塞性肺疾病评估测试问卷（CAT）评分,急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分高于无营养风险组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示高年龄、高mMRC评分、合并慢性胃病、高NLR是AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的危险因素（P＜0.05）,高FEV₁/FVC是保护因素（P＜0.05）。基于回归模型预测AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者营养风险的曲线下面积为0.820,灵敏度、特异度分别为81.97%、83.64%,Hosmer-Lemeshow检验P＞0.05,模型拟合效果良好。结论：高龄、高mMRC评分、合并慢性胃病、高NLR是AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的危险因素,高FEV₁/FVC是保护因素。基于回归模型预测AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险具有较高的价值。