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旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞( mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞.利用RTPCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA (6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC.从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确.采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%.经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中.成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3:10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆.为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞. 相似文献
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摘要 目的:探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的影响因素,并构建预测模型。方法:回顾性选择2021年1月至2022年12月内蒙古自治区人民医院收治的AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者177例,根据营养风险筛查2002(NRS2002)评分将患者分为营养风险组(122例)和无营养风险组(55例)。单因素和多因素Logistic回归分析AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者营养风险的影响因素,并根据回归模型构建预测模型。受试者工作特征(ROC)曲线验证预测模型的预测效能。结果:单因素分析显示营养风险组年龄大于无营养风险组(P<0.05),COPD病程长于无营养风险组(P<0.05),慢性胃病,急性加重次数≥3次/年,改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷(mMRC)评分3-4级比例高于无营养风险组(P<0.05),第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC),体质量指数(BMI),白蛋白、前白蛋白,握力,氧分压(PO2)低于无营养风险组(P<0.05),中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值(NLR),慢性阻塞性肺疾病评估测试问卷(CAT)评分,急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分高于无营养风险组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高年龄、高mMRC评分、合并慢性胃病、高NLR是AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的危险因素(P<0.05),高FEV1/FVC是保护因素(P<0.05)。基于回归模型预测AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者营养风险的曲线下面积为0.820,灵敏度、特异度分别为81.97%、83.64%,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05,模型拟合效果良好。结论:高龄、高mMRC评分、合并慢性胃病、高NLR是AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险的危险因素,高FEV1/FVC是保护因素。基于回归模型预测AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭患者发生营养风险具有较高的价值。 相似文献
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