水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析

目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High FiveTM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV g E1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高g E蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础。     

靶向IL-4主动免疫抑制屋尘螨抽提物诱导的小鼠气道炎症反应

以IL-4为主要驱动的Th2应答是过敏性哮喘的主要免疫病理特征,该文旨在探讨靶向IL-4主动免疫对屋尘螨过敏原刺激的小鼠气道炎症反应的干预作用及潜力。研究以重组制备的、呈现IL-4肽表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠,并以屋尘螨抽提物诱导气道过敏性炎症反应。结果显示,靶向IL-4的主动免疫激发了持续的IL-4特异IgG抗体高水平应答;显著减少气道浸润的总炎性细胞以及其中占主要的嗜酸性粒细胞数目;显著降低了支气管肺泡灌洗液中Th2细胞因子IL-4、IL-13和IL-5水平,而Th1的IFN-γ有升高趋势;显著下调了血清IgG1而上调IgG2a水平;此外,显著抑制了乙酰甲胆碱刺激的过敏小鼠气道高反应性。研究表明,靶向IL-4的主动免疫具有抑制过敏性气道炎症反应的潜力。