乙酰胆碱酯酶基因工程技术研究进展

乙酰胆碱酯酶（AChE）是一种催化乙酰胆碱分解的水解酶。它与有机磷农药有特异反应。利用AchE基因工程技术进行有机磷农药的快速检测、人类疾病防治、生态环境保护和昆虫的抗药性等方面的研究具有非常重要的意义。该文综述了当前国内外有关AchE的基因克隆技术与表达系统的研究进展,并对AchE转基因技术的现状和问题进行了分析讨论。展望了AChE基因工程技术在农药快速检测、环境保护、人类疾病防治等领域中的应用前景。     

皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ的分子克隆及其在不同锌含量日粮处理下的表达分析

伴侣蛋白CCT在蛋白折叠、抗胁迫以及调节细胞生长等生理过程中担负重要作用。研究利用同源克隆和RACE技术克隆了皱纹盘鲍伴侣蛋白CCTζ(HdhCCTζ)cDNA全长序列,并对CCTζ基因的序列特征进行了分析。HdhCCTζcDNA序列长1960 bp,开放阅读框为1599 bp,编码532个氨基酸,生物学软件推测其编码蛋白相对分子量为58.46 kD,等电点为6.53。BLAST分析结果表明HdhCCTζ与哺乳动物、鸟和鱼类等物种的CCT具有较高的同源性。生物信息学分析结果显示,HdhCCTζ蛋白序列中包含3个典型的CCT信号基序(35RTNLGPKGTLKML47,56LTKDGNVLLHEMQIQHP72和84QDDITGDGT92)以及1个腺苷三磷酸结合基序(89GDGTTS94)。此外,在HdhCCTζ蛋白序列中还包含3个糖基化位点(23NISA26,128NKSL131and234NVSL237)。实时荧光定量PCR检测结果显示,HdhCCTζ在皱纹盘鲍组织中为组成型表达,但主要集中在性腺、血淋巴和肝胰腺中表达。使用不同锌含量(6.69 mg/kg、33.85 mg/kg、710.63 mg/kg和3462.5 mg/kg)的日粮来饲喂幼鲍20周后,取其肝脏和血细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术进行HdhCCTζmRNA的表达水平分析。分析结果显示,随着日粮中锌含量的增加,HdhCCTζmRNA在血淋巴和肝胰腺中的表达水平呈现上调的趋势。相比于锌适量组(33.85 mg/kg),过量的锌(3462.5 mg/kg)却能够下调HdhCCTζmRNA的表达水平。上述结果表明,HdhCCTζ的表达受到日粮中锌添加量的影响,而高表达量的HdhCCTζ可能在提高皱纹盘鲍机体抗胁迫过程中发挥重要作用。