鸡源CD40L基因克隆、蛋白表达及生物活性检测

为获得鸡源CD40L (chCD40L)蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH 10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化,获得His-chCD40L蛋...     

苦荞多肽的纯化、结构与体外抗氧化活性研究CSCD

为了探究苦荞多肽粗提液抗氧化活性的主要来源,需要进一步对苦荞多肽进行分离纯化,通过结构鉴定来分析抗氧化活性与多肽结构之间的关系。该研究以苦荞功能提取物废渣为原料提取苦荞粗蛋白辅以植物乳杆菌发酵法制备苦荞多肽,采用大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶、液相色谱对苦荞多肽粗提液进行分离纯化,并以抗氧化活性为指标,筛选抗氧化活性较强的组分,利用液相色谱-质谱联用技术鉴定抗氧化多肽结构。结果表明,纯度不同的苦荞多肽抗氧化能力也不同,经过Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化得到的T-3组分ABTS和DPPH自由基清除能力最优,清除率分别为96%、94%。纯化后苦荞多肽的抗氧化活性显著高于粗提液(P<0.05),但是抗氧化活性并没有完全与苦荞多肽纯度呈正相关,通过液相色谱进一步分离纯化T-3组分后得到的组分T-3-1,苦荞多肽纯度虽然达到了98%,但是对DPPH和ABTS抑制率不再增强,反而稍有下降,抑制率分别为89%和90%。由质谱鉴定结果得到,主要抗氧化肽的氨基酸序列为苯丙氨酸-脯氨酸-酪氨酸Phe-Pro-Tyr(FPY)和酪氨酸-亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸Tyr-Leu-Pro-Phe(YLPF)。研究结果以期为苦荞多肽的进一步开发利用提供一定的理论基础。     

基于磁蛋白标签的黄曲霉毒素氧化酶的分离及应用

建立了以家鸽磁蛋白(clMagR)分离标签为基础的黄曲霉毒素氧化酶(AFO)分离纯化策略及黄曲霉毒素B1(AFB1)清除体系.将具有AFB1降解活性的AFO与clMagR基因共编码,采用pET-28a(+)载体构建了 pET-28a(+)-AFO-clMagR重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)宿主异源表达融...     

新生儿接种两种剂型乙型肝炎疫苗不同时间的免疫水平比较

目的:研究接种两种不同剂型的乙肝疫苗(Hepatitis B vaccine,Hep B)(包括10μg CHO基因工程乙肝疫苗(以下简称10μg Hep B)与5μg重组酵母乙肝疫苗(以下简称5μg Hep B))后不同时间,新生儿体内免疫水平的变化,为新生儿乙肝疫苗的接种提供科学依据。方法:选择2016年7月1日-2018年12月1日在青岛大学附属医院接种且按照0、1、6个月免疫程序完成乙型肝炎疫苗全程接种的,采用化学放光法测定血清中抗体水平,比较接种10μg与5μg Hep B后不同时间新生儿体内抗体变化。结果:接种1、6和12月后,10μg Hep B组新生儿低无应答率显著低于5μg Hep B组,而肝表面抗体滴度明显高于5μg Hep B组(P0.05);12个月后,两组新生儿乙肝表面抗体滴度均呈现下降趋势;10μg Hep B组新生儿乙肝表面抗体阳性率仍显著高于5μg Hep B组(P0.05)。结论:新生儿接种10μg Hep B的免疫效果优于5μg Hep B。