东海北部滨海湿地铁氧化细菌的分布及其对不同氧气穿透深度的响应

【目的】滨海湿地生态系统位于淡水与海水交互地带,含有高浓度Fe²⁺的地下水渗透到沉积物表层形成的湿地径流和周期性潮汐淹水形成的含氧-缺氧界面有利于铁氧化细菌介导的Fe²⁺的生物氧化过程发生。然而,目前缺乏对滨海湿地生态系统中铁氧化细菌类群的全面评估。【方法】以上海崇明西沙湿地公园及浙江舟山市朱家尖岛东沙沙滩两地共5处滨海湿地沉积物为研究对象,分析沉积物的氧气穿透深度等环境参数,并基于16S rRNA基因扩增子测序技术,全面解析不同滨海湿地生态系统中细菌与铁氧化细菌的群落组成与分布特征。【结果】与崇明西沙湿地相比,朱家尖岛东沙沙滩有更深的氧气穿透深度,达到10 mm以上。非度量多尺度分析(non-metric multidimensional scaling, NMDS)统计结果表明,细菌群落结构主要受到区域位置不同导致的环境条件差异的影响,而铁氧化细菌的群落结构则受到采样的区域位置和沉积物氧气穿透深度的共同影响。崇明西沙湿地和朱家尖岛东沙沙滩的优势细菌为蓝细菌门(Cyanobacteria)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、α-变形菌纲(Alphaproteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria);优势铁氧化细菌为嘉利翁氏菌属(Gallionella)、红细菌属(Rhodobacter)、Lepthothrix和Sideroxydans。【结论】通过对崇明西沙湿地和朱家尖岛东沙沙滩沉积物中栖息的铁氧化菌的调查发现,铁氧化细菌的群落组成与湿地沉积物类型导致的氧气穿透深度差异具有密切联系。     

尿激酶变体Glu154—mtcu—PA的构建及其性质研究

利用寡核苷酸介导的定点突变方法,将重组人尿激酶原中Ａｒｇ１５４突变为Ｇｌｕ１５４,得到尿激原变体基因。该激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。经体复性,Ｚｎ＾３＋选择性沉淀以及抗体支析,两种表达产物均被纯化,纯化后的尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原对纤溶酶的敏感性表现一致。两种产物经纤溶酶活化后,分别得到了双链尿激酶和双链尿激酶变体,它们对人工合成的发色底物Ｓ２４４４反应的     

纤维蛋白高亲和性尿激酶变体的研究

150～156位氨基酸缺失的变体尿激酶原scu-PA(dscu-PA)和未突变的尿激酶原(rscu-PA)均在E.coli中获得表达.经体外变复性,抗体亲和层析,2种表达产物均被纯化至银染1条带.经plasmin活化,从dscu-PA得到的变体双链尿激酶dtcu-PA,从rscu-PA得到的重组双链尿激酶rtcu-PA和天然双链尿激酶ntcu-PA对合成底物S2444具有相似的酶学性质,说明缺失突变未影响尿激酶的催化活性中心.对纤维蛋白 fibrin-clot和~(125)I-fibrin-sepharose诱导的纤溶, dtcu-PA明显优于 rtcu-PA,甚至还优于rscu-PA.dtcu-PA对血浆中纤维蛋白原的含量几乎无影响.结果表明dtcu-PA具有较高的fibrin选择性,同时也证明双链尿激酶能够通过改造而获得较高的fibrin选择性.     

尿激酶原变体Glu151-Glu154-mscu-PA的构建及其动力学性质

利用寡核苷酸介导的定点突变方法 ,将重组人尿激酶原 ( recombinant single chain uroki-nase- type plasminogen activator,rscu- PA)中 1 51位赖氨酸 ( Lys1 51 )突变为谷氨酸 ( Glu1 51 ) ,1 54位精氨酸 ( Arg1 54)突变为谷氨酸 ( Glu1 54) ,得到尿激酶原变体基因 ( mscu- PA) .尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在 E.coli中获得表达 ,超声后所得包涵体经体外变复性并得到纯化 .结果表明 ,尿激酶原变体对纤溶酶 ( plasmin)的敏感性比未突变的重组尿激酶原低约 40 % ,转变纤溶酶原 ( Glu- plasminogen)为纤溶酶的活性基本相同 .两种产物经纤溶酶活化后 ,分别得到了双链尿激酶 ( rtcu- PA)和双链尿激酶变体 ( mtcu- PA) .它们对人工合成的发色底物 S2 4 4 4反应的动力学基本一致 ,对 Glu- plasminogen的催化反应的米氏动力学常数 Km 基本一致 ,但 mtcu- PA的 Kcat仅为rtcu- PA的 80 % .酪蛋白降解系统 ( caseinolytic system)实验表明 ,在纤维蛋白和纤溶酶原存在的情况下 ,尿激酶原变体较未突变尿激酶原能加快酪蛋白的降解 ,说明 mtcu- PA对纤维蛋白有一定的亲和性     

重组人尿激酶原的体外变复性研究

重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率,通过对pH,温度,变性剂种类及浓度,蛋白浓度,以及巯基氧化还原对的比率等的定性定量分析,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件,并比较了添加某些非特异有效成分,脉冲稀释,梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。确定了重组人尿激酶原体外变复性的适宜方法,复性效率可达20%～30%。     

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中,在Ｔ７启动子的作用下,经０.１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％,表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性,Ｚｎ^２＋选择性沉淀,抗体亲和柱层析,及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附,所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带,其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。     

人尿激酶原（pro－urokinase）基因在大肠杆菌中的高效表达

本文用ＰＣＲ方法对人工合成的尿激酶原。ＤＮＡ基因５’端进行改造,将之克隆到表达载体ｐＫＫ２３３－２中,转化大肠杆菌ＪＡ２２１,经ＩＰＴＧ诱导,获得了占总菌体蛋白１５％的高表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示表达产物主要为单链尿激酶,并且在菌体内基本上以无活性的包含体形式存在。经体外交复性,从１升培养基中可获得３０００００单位的活性尿激酶原。     

无患子皂苷生物活性及应用研究进展

本文综述了无患子皂苷生物活性和在医药、日化、农业领域应用研究进展,为综合开发利用无患子这一古老而传统的药用植物提供科学依据。     

植物内生真菌在医药开发上的应用研究及展望

本文主要概述了植物内生真菌及其生理活性物质研究的最新进展,而今,它们在医药领域的应用越来越受到人们的关注,植物内生真菌是新的天然药物的重要源泉,在新药开发上具有广阔的发展前景。     

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ－１１ｄ中,在Ｔ７启动子的作用下,经０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＩＰＴＧ诱导,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％,表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性,Ｚｎ＾２＋选择性沉淀,抗体亲和柱层析,及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附,所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带,其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。