LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的血药浓度及其药代动力学

采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中的地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ,并在此基础上研究这两种活性物质在大鼠体内的药代动力学。样品前处理采用沉淀蛋白法,选用Ultimate XB-C8色谱柱(100 mm×2.1 mm,3μm,Welch,USA),采用Sciex 4000 Q-TRAP型三重四级杆串联质谱,电喷雾(ESI)源,多级反应监测(MRM)负离子模式。血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的标准曲线线性范围均为1～2 000 ng/mL(相关系数R0.995),本方法灵敏、快速且稳定。大鼠口服给予地榆标准品后,吸收较快,绝对生物利用度(F_(abs))较小。所建立的方法可准确、快速、灵敏地检测大鼠血浆中地榆皂苷Ⅰ和地榆皂苷Ⅱ的血药浓度,适用于临床前的药代动力学研究。     

野生灵芝BSU01的分离鉴定、生物学特性及其木质纤维素酶活分析

灵芝作为传统中药,具有重要的医药和经济价值。本研究以一株野生灵芝属真菌BSU01为实验材料,通过形态特征和ITS序列聚类分析对其进行了鉴定,探讨了该菌株菌丝生长的最适碳源、氮源、C/N、pH及温度等生物学特征,以及该菌株产木质纤维降解素酶的能力。结果表明,菌株BSU01的形态特征与有柄灵芝相符;且与有柄灵芝ITS序列一致性达99%,并在系统发育树上聚在一起;菌株BSU01菌丝生长最适碳源为果糖或者葡萄糖,氮源为酵母提取物,C/N比为20/1到30/1,温度为30℃,pH值为5.5;菌株BSU01的漆酶、木质素过氧化物酶和Mn依赖过氧化物酶分别为12.13 U/L、0.52 U/L和0.33 U/L;CMCase和木聚糖酶酶活分别为7.14 U/mL和1.88 U/m L。本研究结果将为该菌的进一步开发利用提供数据参考。     

开放手术与内镜治疗胆总管结石的临床疗效对比分析研究

目的:分析探讨内镜括约肌切开与胆管切开取石治疗胆总管结石的疗效比较。方法:回顾性分析2006年1月至2013年1月间收治的胆总管结石病人150例,65例为开放手术组,55例为内镜治疗组,通过比较两组患者手术治疗成功率、操作时间、术中出血量、术后并发症、住院时间及住院费用。结果:开放手术组和内镜治疗组治疗成功率分别为96.92%和98.18%;平均手术时间分别为95.8士14.6和51.32±22.76分钟;术中出血量分别为177.25±48.67和28.23±18.96 mL;术后并发症的发生率分别为9.23%和3.63%;术后住院天数分别为20.54±10.69和8.83±6.41天;住院费用分别为22312.04±4563.42和10518.42±5368.62元;两组间治疗成功率差异均无统计学意义(P0.05)。两组间平均手术时间、术中失血量、术后并发症的发生率、住院天数及住院费用差异均有统计学意义(P0.05)。结论:与开放手术相比,内镜治疗胆总管结石具有安全、有效的优点,是目前治疗胆总管结石的首选方法。     

Ⅱ型糖尿病对小鼠肝脏Cx43蛋白表达及肝纤维化的影响

采用高脂饲料喂养结合链脲佐菌素(STZ)诱导法,建立Ⅱ型糖尿病小鼠动物模型。模型成功建立8周后,检测小鼠血清中葡萄糖、糖化血清蛋白(GSP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)的含量;以苏木精-伊红染色和油红O染色分别观察肝脏组织病理学变化和脂质沉积情况;以Masson染色结合α平滑肌动蛋白(α-SMA)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的免疫组织化学观察肝脏纤维化程度;以蛋白免疫印迹、免疫组化和实时荧光定量PCR分别检测肝脏缝隙连接蛋白43(Cx43)和基因表达。结果表明：与正常组相比,模型组小鼠的血糖、糖化血清蛋白显著升高;肝脏肿大色泽不均,血清AST、ALT、AKP水平显著升高;肝脏组织形态上有所改变,脂质沉积增加;胶原纤维分布显著增加,并且Ⅱ型糖尿病导致了α-SMA表达的增加,E-cadherin表达显著降低;肝组织Cx43表达显著增加。研究结果表明：长期的高血糖易导致小鼠肝损伤和纤维化,从而诱发糖尿病肝病,其肝脏纤维化的机制可能与高血糖诱导Cx43的表达密切有关。     

麻疯树籽壳不同极性部位DNA损伤保护作用及其化学成分分析

为了资源化利用麻疯树籽壳,通过Fentons试剂诱导质粒pUC19 DNA损伤法分析了麻疯树籽壳乙醇提取物不同极性萃取部位(石油醚,氯仿,乙酸乙酯及正丁醇)的DNA损伤保护作用;采用DPPH、ATBS及超氧阴离子自由基清除能力与铁离子还原力评价了其抗氧化能力;利用GC/MS分析了其乙酸乙酯(JEE)和氯仿萃取物(JCE)的化学成分。结果显示,麻疯树籽壳提取物中,JEE的DNA损伤保护作用最强,其次为JCE和正丁醇萃取物(JBE),而JPE作用最弱;四个萃取部位都具有一定的抗氧化活性,且以JCE和JEE的抗氧化能力较强。JCE的DPPH和超氧阴离子自由基清除能力略高于JEE(IC50分别为4.88μg/mL和3 506.59μg/mL),但二者没有显著差异;而JEE的ABTS自由基清除能力和铁离子还原力却显著高于JCE(IC50分别为2.21μg/mL和33.76μg/mL)。此外,JCE和JEE化学成分GC/MS分析显示,二者均以酚类物质为主,相对含量分别为73.92%和49.01%,且二者主要酚类物质均为临香豆酸,相对含量分别为39.25%和20.77%。该研究结果显示麻疯树籽可以用作抗氧剂的生产原料,为其进一步开发利用提供了科学依据。     

腹腔镜TAPP与李金斯坦（Lichtenstein）疝修补术治疗腹股沟疝对血清睾酮浓度、MMP-2的影响

摘要 目的：探讨腹腔镜腹膜前疝修补术（TAPP）与李金斯坦（Lichtenstein）疝修补术治疗腹股沟疝对血清睾酮浓度、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响。方法：选取2017年1月~2021年1月80例腹股沟疝患者,采用随机数字表法将其分为TAPP组（n=44）与Lichtenstein组（n=36）,记录两组手术指标、术后并发症及复发率,于术前和术后1个月血清检测睾酮和MMP-2水平。结果：TAPP组术中出血量、术后肛门排气时间显著少于Lichtenstein组（P＜0.05）,两组手术时间比较无差异（P＞0.05）;TAPP组术后住院时间少于Lichtenstein组,住院费用高于Lichtenstein组（P＜0.05）,两组术后复发率对比无差异（P＞0.05）;TAPP组阴囊水肿发生率显著低于Lichtenstein组（P＜0.05）,其它并发症组间比较无差异（P＞0.05）;两组术前术后血清睾酮均无变化（P＞0.05）。术后两组MMP-2水平均显著降低（P＜0.05）,但组间比较无差异（P＞0.05）。结论：两种术式对股沟疝患者睾丸功能均无损伤,且均可有效降低血清MMP-2水平,防止股沟疝复发,安全有效;相比之下,腹腔镜ATPP创伤更小,术后恢复更快,但手术难度较大,费用较高,两种术式各有优缺点,需结合患者的实际情况选择术式。     

真菌DWL-C010的鉴定及其可溶性红色素热稳定性分析

从广西大王岭自然保护区内原始森林土壤中分离得到一株能够产可溶性红色素真菌 DWL-C010,通过形态特征和多基因位点系统发育分析对其进行了鉴定,并分析了该菌红色素的热稳定性,同时还测定了其纤维素半纤维酶和糖化酶酶活。结果表明,菌株 DWL-C010 形态特征与白二轮蓝状菌基本一致,且其 ITS、RBP2、RBP1 和 Ben A 序列与白二轮篮状菌 CBS133440T相应序列的一致性均高达 99%,Ca M 序列相似性为 96%,并且在系统发育树中二者均聚在了一起,故将其鉴定为白二轮篮状菌。菌株DWL-C010 红色素具有较好的热稳定性,其不同温度下的热解常数与时间具有良好的线性关系,符合一级动力学模型 ;依赖温度的热降解常数也符合 Arrhenius 模型,其活化能为 51.82 k J·mol-1。此外,菌株 DWL-C010 第 6 天的木聚糖酶、纤维素内切酶及糖化酶酶活依次为 33.098、1.880 和 0.976 U/m L。     

miR-194-5p靶向下调 CD44 抑制胃癌肿瘤干细胞上皮间质转化的机制研究

摘要 目的：探讨miR-194-5p靶向下调 CD44 抑制胃癌肿瘤干细胞（CSCs）上皮间质转化（EMT）的相关分子机制。方法：采用 qRT-PCR检测胃腺癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、SPAG-9和MNK-45） 和胃粘膜细胞（GES-1）中 miR-194-5p、CD44、Snail 和膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP） 表达量,Western blot检测CD44、Snail 和MT1-MMP蛋白表达量。体外构建miR-194-5p过表达和低表达质粒载体并进行慢病毒转染,实验分为过表达组、对照组和低表达组,qRT-PCR和Western blot检测miR-194-5p、CD44、Snail 和MT1-MMP的变化;CCK8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞侵袭力,Western blot检测EMT标志物E-cadherin和N-cadherin蛋白表达量。结果：胃腺癌细胞系中miR-194-5p表达显著低于胃粘膜细胞,而CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著升高;SGC-7901和MGC-803与胃粘膜细胞的表达差异最明显（P＜0.05）。与对照组相比,过表达组miR-194-5p表达量明显升高,CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著下降,细胞增殖率和侵袭力下降,凋亡率升高,E-cadherin上调,N-cadherin下调（P＜0.05）。与对照组相比,低表达组miR-194-5p表达量明显下降,CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著增加,细胞增殖率和侵袭力升高,凋亡率下降,E-cadherin下调,N-cadherin上调（P＜0.05）。结论：胃癌中miR-194-5p低表达可能发挥抑癌作用,通过下调CSCs中CD44表达进而抑制EMT的发生。     

真菌DWL-C010的鉴定及其可溶性红色素热稳定性分析

从广西大王岭自然保护区内原始森林土壤中分离得到一株能够产可溶性红色素真菌DWL-C010,通过形态特征和多基因位点系统发育分析对其进行了鉴定,并分析了该菌红色素的热稳定性,同时还测定了其纤维素半纤维酶和糖化酶酶活。结果表明,菌株DWL-C010形态特征与白二轮蓝状菌基本一致,且其ITS、RBP2、RBP1和Ben A序列与白二轮篮状菌CBS133440T相应序列的一致性均高达99%,Ca M序列一致性为96%,并且在系统发育树中二者均聚在了一起,故将其鉴定为白二轮篮状菌。菌株DWL-C010红色素具有较好的热稳定性,其不同温度下的热解常数与时间具有良好的线性关系,符合一级动力学模型;依赖温度的热降解常数也符合Arrhenius模型,其活化能为51.82 k J·mol-1。此外,菌株DWL-C010第6天的木聚糖酶、纤维素内切酶及糖化酶酶活依次为33.098、1.880和0.976 U/m L。