沙门菌鞭毛抗原及其多样性研究进展

沙门菌鞭毛蛋白具有抗原性。鞭毛分型抗原有多种,抗原特异性取决于氨基酸序列和种类的不同,抗原表位在鞭毛蛋白二级结构的可变区部位,在分子水平上抗原决定区位于鞭毛基因中间可变区中。利用分型抗原特异性建立起来的免疫学检测被广泛应用。沙门菌属特异性共同抗原具有属特异性,广泛分布于沙门菌全属。共同抗原具有序列保守性和构像稳定性,在沙门菌属内同源性高,ELISA试验表明此抗原免疫原性较好,利用此抗原属特异性建立起免疫学检测沙门菌属已得到应用。     

弧菌三联融合毒素基因表达及ELISA检测方法建立

采用柔性Linker(GGGGS)和重叠延伸PCR方法将三个毒素基因, 即副溶血性弧菌的耐热型直接溶血素基因tdh、创伤弧菌的溶细胞毒素基因vvhA和拟态弧菌的热不稳定型溶血素基因vmhA的成熟蛋白基因片段进行串联, 得到三联融合毒素基因tdh-vvhA-vmhA(命名为FT)。一致性比对分析与预计融合的基因序列一致性为99.6%。FT的开放阅读框架全长3225 bp, 编码1074个氨基酸残基, 预测分子量为120.4 kDa。将FT亚克隆至表达载体pET-22b(+)中, 再转化至E. coli BL21 (DE3)中进行表达, 经SDS-PAEG分析, 融合蛋白分子量与预测的相符。终浓度为1mmol/L的IPTG, 37 ℃诱导4 h, 融合毒素蛋白表达量最高, 经薄层扫描分析, 此时融合毒素蛋白占全菌体蛋白的11.49%。融合毒素蛋白包涵体经纯化, 免疫豚鼠制备血清抗体, 确定间接ELISA的最佳工作条件, 并进行敏感性、特异性、重复性及模拟样品检测试验, 建立了食物中毒性弧菌广谱、快速、特异的同步免疫学检测方法。