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通过使用 PARP酶的抑制剂研究了降低PARP酶的活性对外源基因转染效率及整合作用的影响, 结果表明,转染的外源基因的吸收及瞬时表达不依赖于PARP酶的活性,而外源基因的整合作用与PARP酶的活性有关。
Abstract:In this study,the effect of lowering PARP activity on the transfection of cultured cells with foreigh genes was evaluated.The results indicated that PARP enzyme involved in the stable integration of foreign genes into the host genome.However,inhibition of PARP activity exhibited no effect on both the uptake into the cells and the expression of the forging genes. 相似文献
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核酶设计、合成与克隆的一种新方法 总被引:5,自引:0,他引:5
介绍了一种设计、合成与克隆人造核酶的新方法.通过在“锤头结构”模型中非保守性区域引入 Bgl I 切点,不仅维持了核酶切割活性所必需的二级结构,而且为核酶克隆的鉴定提供了极为方便的手段.另外还通过在核酶模板两端引入限制性内切酶半切点,一步直接将核酶模板连接、聚合、克隆到体外转录载体上,大大简化了以往核酶克隆的繁琐操作,省时、省力,克隆效率也较高. 相似文献
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使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酞胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响.利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体pSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体pSV2neo-beta-gal.将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的HeLa转化细胞系HeLa-beta-gal.使用PARP酶抑制剂苯甲酸胺处理细胞5周,随后进行细胞基因组Southern杂交分析与细胞内容物β-半乳苷酶的活性检测.结果表明,经BA处理的HeLa-beta-gal细胞β-半乳糖苷酶的活性及杂交带密度与未经BA处理的HeLa-beta-gal细胞相比未有明显区别.结合以前的结果可以认为,PARP酶抑制剂BA并不能导致所有外源基因的丢失,且使用PARP酶抑制剂BA引起外源基因的丢失具有选择性. 相似文献
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PARP酶抑制剂诱导转化细胞逆转及外源ras癌基因丢失的研究 总被引:5,自引:1,他引:5
用 5mmol/L PARP抑制剂苯甲酰胺处理经c-Ha-T24-ras活化癌基因转染得到的转化细胞系, 处理4周后发现转化细胞系的某些细胞生物学特性发生了改变,呈现出正常细胞的某些特性。伴随这一现象,检测到细胞中整合的外源T24-ras基因发生了丢失。
Abstract:A transformant line obtained by transfection of NTH3T3 cells with c-Ha-T24-ras gene was treated with 5mmol/L benzamide,an inhibitor of PARP enzyme for 4 weeks.Some changes in cellular properties of the transformant line were observed.Concomitant with these changes was the deletion of the exogenous c-Ha-T24-ras which had been integrated into genomic DNA of recipient cells. 相似文献
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针对点突变癌基因转录物的核酶细胞内性质的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
前文[1]已证实在体外(invitro)实验接近生理环境的条件下,本室设计、合成并克隆到的核酶能够高效选择性的定点切割T24-ras活化癌基因转录物。在此基础上,为阐明该核酶在体内(invivo)的生理活性,本文又进一步把核酶基因片段克隆在真核表达质粒pSMG上,并将重组质粒以磷酸钙沉淀法转染由T24-ras基因诱导的转化细胞系。在细胞和分子水平上检测了核酶在真核细胞内的生物学活性:表现为各恶性转化细胞系的形态特征逆转,生长速度减慢,并呈现出重叠生长减弱恢复接触抑制的趋势,细胞凝集行为接近正常、软琼脂集落形成能力下降;同时,引物延伸实验结果也表明:在体内实验条件下,核酶能够特异性切割点突变T24-ras癌基因转录物,抑制癌变细胞的恶性行为,使其得到一定程度的逆转。 相似文献
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