2007-2010四年间鲍曼不动杆菌耐药性变迁及对亚胺培南耐药的机制研究

目的研究2007-2010四年间中山大学附属第一医院临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药性迁移情况和耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌(IRAB)的耐药机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用VITEK 2型全自动微生物检测系统对细菌进行鉴定及药敏分析;用PCR方法检测碳青霉烯酶基因blaOXA-51、blaOXA-23、blaOXA-24和blaOXA-58。结果 2007-2010四年间分离鲍曼不动杆菌811株,耐药率逐年上升,其对头孢哌酮/舒巴坦、美罗培南、头孢吡肟、亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率上升明显,如对亚胺培南的耐药率自2007-2010年分别为13.1%、26.0%、44.3%和59.5%。811株鲍曼不动杆菌中IRAB有311株,IRAB对抗生素的耐药率明显升高,但四年间的耐药率变化并不明显。对IRAB敏感的抗生素以阿米卡星为首,其次为头孢哌酮/舒巴坦,但头孢哌酮/舒巴坦的敏感率逐年下降。从311株IRAB中随机抽取140株,检出blaOXA-51基因阳性125株(89.3%),blaOXA-23基因阳性29株(20.7%),blaOXA-24基因阳性3株(2.14%),blaOXA-58基因阳性22株(15.7%)。结论鲍曼不动杆菌的耐药性逐年升高,以阿米卡星与头孢哌酮/舒巴坦联合应用为有效的治疗方法,产碳青霉烯酶是IRAB的主要耐药机制。     

接合转移质粒pUCP24T的构建与性能研究

目的 构建能在大肠埃希菌(E.coli)和铜绿假单胞菌(PA)间高效接合转移的质粒.方法 通过NCBI blastn程序分析质粒pCVD442接合反应起始序列oriT,PCR扩增oriT后插入pMD18-T,再将pMD1 8-oriT转化E.coli DH5α,经酶切、测序验证后用SmaI和HindIIII双酶切亚克隆至质粒pUCP24,获得质粒pUCP24T,将pUCP24T转化E.coli后研究pUCP24T从E.coli到PA的接合效率和质粒稳定性等.结果 成功构建pUCP24T重组质粒,在E.coli和PA的接合实验中,E.coli(pUCP24T)-PA共培养2h的接合效率平均为3.588×10-2,按12 h一代连续9代继代培养108 h,抗生素压力下质粒保存率为98.29％,无抗生素的培养基中质粒保存率为21.76％.结论 成功构建高接合效率的接合转移质粒pUCP24T.     

黑曲霉原生质体诱变选育β-葡萄糖苷酶高产菌株

本研究报道了以原生质体诱变技术选育高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉菌株,并研究了其发酵特性。以黑曲霉CGMCC3.316为出发菌株,通过紫外诱变得到突变株3-3M。然后以3-3M为供试菌株,研究了其原生质体制备与再生的条件。最后通过原生质体诱变,选育得到一株β-葡萄糖苷酶活力较高的突变株60B-3D。该菌株具有良好的遗传稳定性,酶活力平均达到23IU/mL,与出发菌株CGMCC3.316相比提高39%。此外,该菌株的木聚糖酶活力也有所增加。同时考察了黑曲霉60B-3D的发酵特性,并与3-3M和出发菌株进行比较,结果表明该菌株有较高的蛋白分泌能力。本研究为发酵生产β-葡萄糖苷酶提供了一株良好的供试菌株。     

热蛋白质组学分析：一种全面评估蛋白质状态的技术

热蛋白质组学分析（thermal proteome profiling,TPP）是细胞热漂移测定（cellular thermal shift assay,CETSA）与定量质谱（quantitative mass spectrometry,MS）的结合,所以也称为MS-CETSA。热蛋白质组学分析通过测量不同加热温度下细胞或细胞裂解物中可溶蛋白的含量来确定整个蛋白质组的稳定性。蛋白质可以在与药物或代谢物等小分子、核酸或其他蛋白质相互作用或在翻译后修饰时改变其热稳定性,而热蛋白质组学分析可以根据有无配体结合蛋白质的热稳定性差异来确定靶蛋白。目前热蛋白质组学分析已成功应用于识别药物的靶点和脱靶点,探究蛋白质-代谢物和蛋白质-蛋白质的相互作用。总体上,国内对这个技术的了解仍然欠缺,对此,文中对热蛋白质组学分析的原理、方法、应用以及优势与局限性进行了综述。     

陆地棉EST-SSRs在向日葵中的通用性研究

利用陆地棉EST-SSR s(Expressed sequence tags-s im p le sequence repeats)在陆地棉和向日葵品种中进行了通用性分析。利用本实验室合成的1 500对陆地棉EST-SSR s在4个陆地棉品种中进行了扩增,有效扩增比率为95%,扩增产物符合预期大小(50~500 bp);每对引物可以检测到1~6个数目不等的片段(a lle le),平均约为2.7个;每2个陆地棉之间大约有7%~9%的多态性。从1 500对陆地棉EST-SSR s引物中选取400对引物在向日葵中进行了扩增,有效扩增比率为63%,每对引物可以检测到1~6个数目不等的片段,平均为1.7个,片段大小介于50~500 bp之间。选取了200对在向日葵中得到有效扩增的引物对向日葵G 101的父母本进行了多态性筛选,约25%引物具有多态性。结果表明,陆地棉EST-SSR s在向日葵中具有较高的通用性,可用于向日葵比较基因组研究和分子标记研究。     

利用原生质体融合技术选育淀粉发酵产DHA的新型裂殖壶菌

以生产DHA的裂殖壶菌(Schizochxtrium)B4D1和黑曲霉(Aspergillus niger)CGMCC 3.316为出发菌株,利用原生质体融合技术选育可以利用淀粉发酵生产DHA的新型裂殖壶菌。用裂解酶制得了两亲本的原生质体,通过研究两亲本培养时间、培养方法、酶解时间等条件对原生质体产量影响的基础上,以PEG介导进行了原生质体的融合,最终确定了原生质体融合最佳条件为40%的PEG6000,融合温度30℃,融合时间为10 min,在此条件下融合率可达1.9%。通过比较菌落外观、颜色、形态以及分离培养筛选获得了一株利用淀粉裂殖壶菌融合子。经过RAPD验证表明B4D1与CGMCC 3.316发生了重组,融合菌株表达了更多源于B4D1的遗传信息。     

蛇毒清栓酶治疗突发性耳聋48例疗效报告

本文报告用清栓酶治疗突聋48例的疗效观察。其中男40例,女8例,总有效率为88％。文章指出,病程越短,疗效越好,强调早期诊断,早期治疗。清栓酶与低分子右旋糖酐组治疗突聋进行了对比。清栓酶的疗效明显优于后者。清栓酶治疗突聋的机理是通过药物去纤、降粘、解聚、溶栓、扩血管,改善微循环等作用而实现的。清栓酶为治疗突聋的一种新方法,此药治疗作用迅速。效果可靠,无明显毒副作用,值得推广使用。     

表达乙肝病毒受体人ASGPR转基因小鼠的建立

目的：建立表达乙肝病毒受体人ASGPR的转基因小鼠。方法：克隆人的脱唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）两个亚基的cDNA,连入PCAGGS构建转基因表达载体,以显微共注射的方法将两种各3.9kb的转基因片段引入小鼠的受精卵。采用PCR、Southern印迹、RT-PCR、Western印迹的方法对转基因小鼠进行鉴定。结果与结论：获得了在小鼠肝脏组织中共表达有乙肝病毒（HBV）受体ASGPR H1和ASGPR H2的一个转基因小鼠系,可为HBV的研究提供一种良好的感染动物模型。     

大鼠延髓内脏带IFN-γ分布免疫组织化学法研究

The distribution of Interferon-γ-immunoreactive(IFN-γ-IR)in neurons and fibers in the medullary visceral zone(MVZ)of the rat were studied by using the streptavidin-perosidase(SP) immunohistochemical method.The results show that IFN-γ-IR positive neurons and fibers were densely distributed in the rat MVZ.Some INF-γ-IR positive neurons and fibers were densely stained,and some were sparsely stained.Some were large,and some small.Morphological variation also existed among them.IFN-γ-IR positive neurons and fibers mainly occurred in the ambiguous nucleus(nA),ventrolateral reticular nucleus(nVL).dorsal motor nucleus of the vagus nerve(dmnX),nucleus tractus solitarus(NTS) and intermediate(IRT) parts.IFN-γ-IR positive fibers could be divided into 3 kinds:net shaped.thin-long and dot fibers.     

四种测定纤维素酶发酵过程生物量方法的比较

分别采用测定菌丝体蛋白的方法、测定核酸的方法、酸洗干燥法和纤维素测定仪的方法测定以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中的生物量。通过对发酵液取样测定比较,结果发现,采用测定核酸的方法精密度最高,其RSD值为6.32%,该法同纤维素测定仪的方法均可用于精确测定以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中的生物量。酸洗干燥法的测定结果精密度较差一些,但由于操作简便,也可用于常规分析。而测定菌丝体蛋白的方法无论是在精密度上还是操作简便性上均不占优势,该方法可作为另外3种方法的补充。为以不溶性纤维素为底物发酵产纤维素酶过程中生物量的分析检测提供了选择方法的依据。