DNA连接酶及其应用

引言在六十年代后半期,从大肠杆菌及用T_4噬菌体感染的大肠杆菌中发现了DNA连接酶,它能起催化修复DNA双股链中单股断裂(缺口)的作用(图1)。以后不久,陆续在哺乳动物细胞、高等植物、Rous肉瘤病毒颗粒和带λ_(c_1)噬菌体的大肠杆菌中找到这种酶。它广泛存在于生物有机体中,而且很多特性都是近似的,有普遍的生物学意义,因而,对酶及其应用的研究     

枯草杆菌(Bacillus subtilis)转化的研究I．受体菌株的筛选

混合两个枯草杆菌抗链霉素突变体的核酸,对149株枯草杆菌进行转化试验,筛选到Ki-2为一可转化的受体菌株。用紫外线诱变,从Ki-2获得的9个营养缺陷型其中包括尿嘧啶、异亮氨酸、褓氨酸、苏氨酸、撷氨酸加异亮氢酸、苏氧酸加蛋氦酸、辙氨酸加亮氨酸加异亮氨酸、苏氨酸加异亮氨酸加檄氨酸、苏氨酸加亮氧酰加异亮氨酸加颛氯酸的缺陷型各一个,都可进行转化。以单独核酸分刖进行转化试验表明,四个抗链霉素突变体中,有一个不能作耠体。观察了有转化活性的DNA与无转化活性的DNA按不同比例混合后对转化作用的影响。讨论了用混合不同耠体核酸从大量菌株中簖选受体菌株的方法。     

氨基酸产生菌E_(65)中质粒的分离与鉴定

在棒杆菌与短杆菌中,用微量质粒分离方法筛选到一株含多种质粒的乙酰短杆菌(Brevibacterium actylicum)E_(65)菌株,该菌株具有产氨基酸特性。进一步大量制备其质粒DNA,并进行氧化绝密度梯度超离心纯化,以及电泳分析,电镜观察,并对质粒进行分离与鉴定,从而确定了每种质粒的分子量大小。     

人胰岛素原基因在酵母中的分泌表达

 我们研究了外源基因——合成的人胰岛素原基因在酵母α因子系统中的表达和分泌。用表达载体YTI-15转化酵母63号株可得到每升约2毫克的人胰岛素原分泌产物。     

质粒分子量的电子计算机电镜测定

本文提出了用电子计算机测定电镜照片上环状质粒DNA长度的方法和计算机设计程序。并据此测定了从短杆菌中分离得到的未知质粒的分子量。     

基因工程在氨基酸产生菌中的研究进展

氨基酸与人类和饲养动物生长发育,关系甚为密切。在食品工业与医药工业中是一个重要的生产品种,年消耗量很大,所以每年都要大量生产(见表1) 目前,需求量大的谷氨酸,赖氨酸等,都是采用发酵法生产,所用的菌株大多是棒状杆菌属和短杆菌属中的菌株。由于这两类菌没有杂交系统,所以菌株的改良,产量的提高只有依靠诱变与筛选。近几年来,随着分子生物学,尤其是基因工程方法的发展,为了提高氨基酸产量,在这二类菌中也开展这方面的工作。本文就这方面的研究情况,作一简明的介绍。     

兔胰mRNA的制备与有胰岛素免疫活性多肽的体外翻译

本文报道从兔胰组织中提取出总RNA后,经oligo(dT)纤维素柱层析纯化,得到兔胰mRNA。研究了此mRNA在麦胚无细胞体系中的翻译。不同的pH和不同浓度的乙酸钾对兔胰mRNA的翻译活性有不同程度的影响。当麦胚体系中镁离子低到1.5mM时,精脒的浓度对兔胰mRNA的翻译也有重要的作用。 利用放射免疫的方法,在麦胚无细胞体系所翻译的混合产物中,测出了胰岛素的免疫活性,大约每50微升中含有2.5微单位。