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本文对硫酸右旋糖酐粗制的VLDL和LDL混合液,再以区带超离心分离提纯的VLDL和LDL的样品,进行纯度鉴定、理化性质、免疫活性和化学组成的分析。琼脂糖和聚丙烯酰胺电泳结果证明,经脂质和蛋白染色均呈现一条带;免疫双扩散和免疫电泳只呈现一条沉淀弧;超速离心分析LDL 只有一个单一面尖锐的峰,上浮速率为6.75,与直接由人血清分离者无明显差异。证实本实验方法所得VLDL 和LDL 为较纯的制品,但从VLDL 和LDL 各管的琼脂糖电泳行为、电子显微镜中的分子颗粒大小以及VLDL 在分析超速离心中的上浮速率均提示:二者有亚类的存在,特别是VLDL。VLDL 和LDL 的化学组成分析说明LDL 与文献上报道数据一致,但VLDL 有一定差异。本方法为大量制备纯净的VLDL 和LDL 提供了一个有效的方法。 相似文献
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分离提取树(treeshrew,TS)肝组织mRNA,以此为模板,反转录构建了TS肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗TS载脂蛋白CI多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆。测序及序列分析表明:两个克隆均为TSapoCIcDNA基因。大的克隆由380个核苷酸构成,包括21bp、95bp组成的5′和3′非编码区,264bp组成的一个完整开放阅读框架,编码88个氨基酸的apoCI前体,含26个氨基酸构成的信号肽和62肽的成熟蛋白。其成熟肽长度与大鼠、小鼠和狗的相应结构一致,但较人和狒狒apoCI的成熟肽多5个氨基酸。并对其功能域进行了初步预测。RNA印迹显示TSapoCImRNA不仅主要在肝组织表达;而且不同于人和其他哺乳类动物,亦可少量在小肠表达。上述结果为进一步研究TSapoCI基因组结构、功能和体外表达奠定了基础。 相似文献
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以从树肝脏mRNA逆转录得到的Ⅰ链cDNA为模板 ,运用SMARTRACEPCR技术 ,扩增得到树载脂蛋白E(apoE)cDNA序列 ,并推导出apoE蛋白质的氨基酸序列 .利用分子生物学软件包PCGENE对氨基酸序列和二级结构进行分析和比较 .结果表明 ,树apoEcDNA序列 (作为新基因已被GenBank接收 ,登录号为AF 30 3830 )由 1138bp构成 ,其中 5′非翻译区 6 4bp ,3′非翻译区 135bp ,939bp组成一个完整开放阅读框架 ,与人apoEcDNA的同源性为 86 % .编码 313个氨基酸组成的apoE前体 ,包含 18个氨基酸构成的信号肽和 2 95个氨基酸组成的成熟蛋白 .与人apoE氨基酸序列的同源性为 78% .树apoE与人及其它种属动物apoE在氨基酸组成上相近 ,但比人apoE少4个氨基酸 ,比动脉粥样硬化易感动物家兔apoE多 2个氨基酸 .经Garnier法预测 ,树apoE蛋白二级结构与人apoE相似 ,螺旋构象 (helical) 6 9 9% ,伸展构象 (extended) 16 6 % ,转角构象 (turn)6 0 % ,无规则卷曲 (coil) 7 6 % . 相似文献
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用差异显示-PCR方法,从血管内皮细胞中获得一新的cDNA片段,以该片段为探针,从人主动脉cDNA文库中筛选到一个长2198 bp的cDNA克隆,经DNA测序及同源性分析,发现该序列中含有与血管生成素-1 FD编码区及3′端部分非翻译区完全互补的碱基,推测该克隆为体内血管生成素-1的天然反义RNA,命名为Gna-1,它不编码蛋白质.RT-PCR方法证实, Gna-1在人脐静脉内皮细胞及ECV304中有转录,推测Gna-1可能具有调控血管生成素-1的作用,参与血管再造过程. 相似文献
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本文报道了用区带转头超速离心分离人血清两种低密度脂蛋白的新方法,该法先用硫酸右旋糖酐粗提,浓缩,得到人血清中VLDL和LDL混合液,然后再用溴化钠密度梯度区带超速离心法将VLDL、LDL及其中少量的杂蛋白分开,最后获得较大量纯净的VLDL及LDL制品。本法分离效果好,重复性佳,固定离心条件后,特别是离心速度和时间,可在相同的位置获得VLDL和LDL样品。又由于分离时样品已浓缩,区带超速离心后仍能保持较高的浓度,因而可直接观察VLDL和LDL所在的管数,简化了步骤、缩短了时间,不需浓缩即可使用,避免了在样品浓缩过程中可能产生的变化。本文为大量制备纯净的VLDL及LDL提供了一较大量分离的方法。 相似文献
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载脂蛋白A-Ⅰ(Apo A-Ⅰ)是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白质组分,在HDL介导的胆固醇逆向转运中发挥重要作用.Apo A-Ⅰ三级结构仍不清.在新生盘状HDL分子中, Apo A -Ⅰ主要存在两种结构模型:栅栏模型和带状模型.Apo A-Ⅰ可通过其N末端及C末端结构域与磷脂结合,引发HDL形成.Apo A-Ⅰ作为细胞胆固醇的受体,促进HDL 对外周组织胆固醇的摄取.Apo A -Ⅰ氨基酸残基144~186为卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)主要激活域,通过激活LCAT,促进胆固醇逆向转运. 相似文献