β- 萘黄酮能抑制荧光素酶活性

目的:研究β-萘黄酮对荧光素酶活性的影响。方法:利用人GCLC基因调控序列驱动的GCLC-PGL3-enhancer-Luciferase报道载体(PL45)转染人肺腺癌细胞A549,人肝癌细胞HepG2,人子宫颈癌细胞HeLa,人乳腺癌细胞MCF-7,人肝癌细胞Bel-7402,人支气管上皮细胞16HBE,β-萘黄酮刺激后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对GCLC基因表达的影响。wester blot检测β-NF刺激16HBE细胞后GCLC蛋白水平的变化。β-萘黄酮刺激转染了表达Luciferase的真核表达载体pRC/CMV2-luc+的A549和HepG2细胞后,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因表达的影响。PL45转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用β-NF刺激,双荧光素酶报告基因检测系统分析其对Luciferase基因的影响。结果:在各种细胞中,转染PL45报道载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降(P<0.01)。wester blot结果显示β-NF处理组GCLC蛋白的表达较DMSO对照组明显升高。在A549和HepG2细胞中,转染pRC/CMV2-luc+载体后,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降(P<0.01)。PL45转染A549和HepG2细胞,裂解细胞后用β-NF刺激,β-NF处理组荧光素酶相对活性值与DMSO对照组相比均明显下降(P<0.01)。结论:β-萘黄酮直接抑制了荧光素酶的活性     

MTT法用于药物对L2细胞毒性的实验研究

目的：评价噻唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的毒性作用的可靠性。方法：大鼠肺泡上皮L2细胞以叔丁基对苯二酚（TBHQ）10．100μM,BsO以1-10mM分别处理,用MTT法检测细胞活性、JC-1（5,5’,6,6’-四氯．1,1’,3,3’-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物）荧光染料法检测细胞线粒体电位改变、台盼蓝排斥实验检测细胞死亡率,分析各指标的情况。结果：在处理剂量范围,MTT法检测到的光密度（OD）值未能达到一般判断的半数抑制浓度（ic50）水平,最高抑制率仅达到30％左右;台盼蓝排斥试验检测数据表明TBHQ的LC50值为50μM,丁硫氨酸亚砜胺（BSO）为5mM;利用JC-1荧光染料判断的半数凋亡剂量分别为50μM和7mM。结论：MTT法作为最常采用的细胞生长抑制检测手段,但在某些特定实验中可能不能客观地反映细胞的活性,建议多种方法结合进行评价。