人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析

纤溶酶原K1－3功能区是近年发现的血管生成抑制因子,具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K1－3功能区的基因,DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9上获得重组质粒pPIC9K13转化毕节酵母GS115,用PCR和G418法筛选高拷贝转化子,进行摇瓶发酵。SDS－PAGE和Western blot分析结果证实K1－3基因已在GS115分泌表达,并具有免疫活性。选用30L和80L罐进行高密度发酵,甲醇诱导48h细胞密度达到OD250－300,比摇瓶提高5－6倍,表达量150－200mg/L,发酵上清液经Streamline SP离子交换及Phenyl-Sephorose疏水层析纯化,在SDS－PAGE上显示一条带,纯度96％,动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性。     

四氧嘧啶致大鼠糖尿病与脂类过氧化

四氧嘧啶致SD大白鼠糖尿病的过程中,首先引起体内多种组织器官广泛发生脂类过氧化作用。脂类过氧化物分解产生一些醛类物质,故血清、胰腺、肝和肾组织中TBA反应物(主要成分为丙二醛)含量升高;生成的其它醛类物质与蛋白质结合形成的水溶性荧光物质含量亦增多。抗氧化剂维生素E的抗脂类过氧化作用对机体起保护作用;而维生素C在大量氧化剂四氧嘧啶存在的条件下起氧化强化剂的作用,并使机体对维生素E的消耗增多。     

人纤溶酶原K1-3基因的克隆、表达和产物的纯化及抗癌活性分析

纤溶酶原K13功能区是近年发现的血管生成抑制因子,具有抑制肿瘤生长和转移的活性。以人血管生成抑制素cDNA为模板用PCR技术扩增了K13功能区的基因,DNA序列分析后克隆至质粒pPIC9K上获得重组质粒pPIC9K13,转化毕节酵母GS115,用PCR和G418法筛选高拷贝转化子,进行摇瓶发酵。SDSPAGE和Western blot分析结果证实K13基因已在GS115分泌表达,并具有免疫活性。选用30L和80L罐进行高密度发酵,甲醇诱导48h细胞密度达到OD250～300,比摇瓶提高5～6倍,表达量150200mg/L。发酵上清液经Streamline SP离子交换及PhenylSephorose疏水层析纯化,在SDSPAGE上显示一条带,纯度96%,动物实验证明纯化产物具有抗血管生成和抗肿瘤的活性。      

重组人纤溶酶原K1-3蛋白的抗肿瘤活性研究

人纤溶酶原K1-3功能区是一个血管生成抑制因子。以人纤溶酶原k1-3基因在大肠杆菌中表达的重组K1-3蛋白进行鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoicmembrane,CAM)血管生成抑制活性分析和小鼠B16黑色素瘤抑瘤实验,结果证实重组K1-3蛋白具有抑制毛细血管生成和抗肿瘤活性。