银环蛇神经毒素的分子克隆和功能表达(英文)

抽提银环蛇毒腺总ＲＮＡ,通过反转录ＰＣＲ技术扩增出其神经毒素ｃＤＮＡ,克隆并测定了全序列。银环蛇神经毒素的ｃＤＮＡ编码２１个氨基酸的信号肽和７４个氨基酸的成熟蛋白。该信号肽非常类似于短链神经毒素、κ－神经毒素和心脏毒素的信号肽。而成熟蛋白的氨基酸序列与从台湾产银环蛇中通过蛋白测序鉴定的α－ｂｕｎｇａｒｏｔｏｘｉｎ的氨基酸序列完全一样。此外,还克隆到该神经毒素缺失前体ｃＤＮＡ。利用麦芽糖结合蛋白融合     

分子伴侣过量表达对蛋白质分泌及可溶性的影响

 通过过量表达大肠杆菌分子伴侣 Sec B和 Gro EL,研究了它们对靶蛋白的分泌及可溶性的影响 .在过量表达 Sec B的宿主菌中 ,周质空间分泌蛋白总量较对照组提高了约 71 % ,GL- 7- ACA酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 1 .5倍 ,碱性磷酸酯酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 54% ;在过量表达 Gro EL的宿主菌中 ,周质分泌蛋白总量较对照组提高了约 52 % ,青霉素 G酰化酶在周质空间酶的活力较对照组提高了约 76% ,鲑鱼降钙素六聚体的可溶性组分的比例由原来的 45%增加到约 90 % ,而 MS2 -人白介素 - 3融合蛋白的包涵体有约 1 5%转变为可溶性组份 .上述结果表明 ,分子伴侣 Sec B和 Gro EL的过量表达促进了靶蛋白的分泌 ,Gro EL增加了靶蛋白的可溶性     

五步蛇蛇毒金属蛋白酶cDNA的克隆和序列分析

抽提五步蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增出五步蛇毒腺中一种低分子量金属蛋白酶(aculysinl)的cDNA,克隆到pGMT-vector并测定了全序列.推导其编码的蛋白质序列,发现aculysinl是以酶原形式合成的分泌蛋白,酶原包括信号肽、前肽、金属蛋白酶成熟肽和间隔肽4个部分.金属蛋白酶成熟肽与其它蛇毒金属蛋白酶相比,蛋白质一级结构具有一定的同源性,有一个保守的Zn2+结合位点:HEXXHXXGXXH.Aculysinl含有6个半胱氨酸,推测形成3对链内二硫键.五步蛇低分子量金属蛋白酶cDNA的克隆,为研究蛇毒金属蛋白酶结构与功能的关系,以及开发治疗血栓药物打下了良好的基础     

β—银环蛇毒素A链cDNA的克隆和表达

从银环蛇毒腺中抽提总ＲＮＡ,ＲＴ－ＰＣＲ扩增编码β－银环蛇毒素Ａ链的ｃＤＮＡ,克隆并测定了全序列。一个新的ｃＤＮＡ得以克隆,其编码一个２７个氨基酸的信号肽和一个１２０个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白和其他β－银环蛇毒素Ａ链一样,具有１３个位置固定的半胱氨酸,而且和这些Ａ链具有很高的同源性。此外,以同样的引物,从眼镜蛇毒腺总ＲＮ中。克隆到编码眼镜蛇ＰＬＡ２前体的ｃＤＮＡ。将β－银环蛇毒素Ａ链和眼镜蛇Ｐ     

蛇毒神经毒素类似物的免疫学分析

选取眼镜蛇蛇毒和银环蛇蛇毒中 1 0个差异较大的神经毒素类似物 ,通过麦芽糖融合表达系统使它们在大肠杆菌中得到高效可溶性表达 .通过 Amylose- Sepharose6B亲和树脂纯化这些融合蛋白 .分别制备这 1 0种融合蛋白多克隆抗体 .同时将这 1 0种神经毒素类似物进行硫氧还蛋白融合表达 ,表达产物基本上都是包涵体 .以硫氧还蛋白融合表达产物为抗原和上述 1 0种神经毒素类似物抗血清进行 Western blotting.结果显示 ,大多数神经毒素类似物之间没有免疫交叉反应 ,表明这些神经毒素类似物的抗原性差别较大 ,可能存在不同的分类和进化     

IL-17的信号传导及功能研究

白介素17(IL-17),辅助性T细胞T_H17分泌的特征性细胞因子,在抵抗胞外细菌、真菌感染的宿主防御以及各种自身免疫性疾病发病中起到了重要的作用。本文对T_B17细胞、IL-17的发现作了历史性回顾,并综述了IL-17受体介导的信号传导途径和生理功能的研究进展,为T_H17细胞、IL-17及其受体作为药物治疗的新靶点提供新思路。     

蛇神经毒素的表达和鉴定

抽提中华眼镜蛇毒腺总RNA,通过反转录PCR扩增Cobrotoxin cDNA,克隆并测序。该cDNA编码83个氨基酸,包括21个氨基酸的信号肽和62个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白的氨基酸序列和通过蛋白测序从台湾眼镜蛇鉴定的Cobrotoxin完全一致。PCR扩增编码Cobrotoxin的DNA,并亚克隆到表达载体pMAL-P₂。此外,通过合成寡核苷酸片段,拼接成完整的CM11基因,并将其克隆至pMAL-P₂。经IPTG诱导,两种神经毒素基因在大肠杆菌中都得到高效的可溶性融合表达。表达产物通过SDS-PAGE和蛋白印迹杂交加以鉴定。表达的融合蛋白经过Sepharose 6Bamylose亲和色谱和DEAESepharose FF离子交换色谱得到有效纯化。经Xa因子酶切后得到的两种重组神经毒素都具有小白鼠体内毒性。