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将江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas,A.h.P)神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因克隆于分泌型原核表选载体pET-22b+,以c端融合了6个组氨酸的形式在大肠杆菌B12l(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的20%左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用6mol/L的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达80%左右。对该重组肽进行变复性研究。利用PCl2细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有NGF生物活力。 相似文献
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神经生长因子与细胞凋亡 总被引:8,自引:0,他引:8
神经生长因子(NGF)是第一个被发现、也是目前为止研究得最清楚的一个神经营养因子(neurotrophicfactor)。它能够促进发育中的感觉神经元及交感神经元的存活及分化,营养成熟的神经元,维持其正常的生物学功能。然而,近两年来研究发现,NGF也... 相似文献
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江浙蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)蛇毒神经生长因子的分离纯化和特性 总被引:3,自引:0,他引:3
神经生长因子(nerve grow th factor, N G F)是第一个被发现,也是迄今为止研究得最为清楚的一种神经营养因子 利用 P C12 细胞生物活力测定为跟踪检测手段,分别经过 C M Sepharose C L 6 B、 Sephadex G 75 及 F P L C m ono S层析,从30 g 江浙蝮蛇粗毒中分离纯化到200 μg N G F,纯化倍数高达105经 S D S P A G E 测定,该蛋白分子量为 26 k D,由两个亚基通过二硫键交联组成二体形式等电聚焦显示其等电点为67,与氨基酸组成分析结果相吻合 江浙蝮蛇神经生长因子的生物活力水平与小鼠25 S N G F相当,在1~100 μg/ L 的浓度范围内维持 P C12 细胞在无血清条件下的存活 相似文献
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尖吻蝮蛇毒中类似于神经营养性因子物质的纯化及特性 总被引:2,自引:0,他引:2
分别利用离了交换,凝胶过滤及monoS多步层析,从尖吻蝮蛇提纯到一个类似于神经营养因子的蛋白质。通过胶胶过滤测定其分子量为26kD,由两个亚基 共价相互作用相连接在一直等电聚集显示其等电点为7.8。.它的生物活力与小鼠2.5SNGF相当,在1-100μg/L的浓度范围内维持PC12细胞在无血清培养基中的存活。同时,它还可以诱导PC12细胞转变为类似于交感神经元的表型 。 相似文献
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用凝胶阻滞分析的方法, 发现鼠T淋巴细胞系CTLL-2在白细胞介素-2(IL-2)刺激下可活化一个DNA结合因子, 它与γ-干扰素活化序列(GAS)专一性结合, 命名这个DNA结合因子为白细胞介素-2活化核因子(IL-2-NAF).IL-2-NAF的活化非常迅速, 不需要新的蛋白质合成, 并且它的活化程度随着IL-2刺激细胞的时间的不同而发生相应的变化. 进一步研究表明, IL-2-NAF的活化过程是通过酪氨酸激酶的信号传递途径, 并且它本身的酪氨酸残基也被磷酸化, 酪氨酸残基的磷酸化为其结合DNA所必需. IL-4、γ-IFN刺激CTLL-2细胞不活化与GAS专一性结合的因子. 而在Hut-102细胞中, IL-2、IL-4均可活化GAS结合因子, 但活化程度较弱. 相似文献
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江浙蝮蛇神经生长因子在家蚕幼虫中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
江浙蝮蛇神经生长因子(NGF)基因克隆于昆虫病毒转移栽体pBacPAK8中,获得重组转移栽体pBac-PAK-NG〈与线性化Bm-AacPAK6修饰病基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒洒家蚕幼虫,5天后收集血淋巴,经SDS-PAGE检测及利用PC12细胞进行NGF生物活力测定证明,神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达,且表达产物具有良好的生物学活性 相似文献
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用蛋白质酪氨酸磷酸酯酶(PTPase)抑制剂正矾酸钠处理细胞,可以大为增强细胞内蛋白质的酪氨酸磷酸化水平.电泳迁移率变动分析(EMSA)发现,此时Stat5发生酪氨酸磷酸化而被激活,并与γ-干扰素活化序列(GAS)结合.与白细胞介素-2(IL-2)活化Stat5不同,正矾酸钠对Stat5的活化不能被蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂完全阻断.此外发现,正矾酸钠可以加强IL-2对启动子区含有GAS的报告基因表达的上调作用.以上结果证明PTPase对IL-2诱导的JAK-STAT信号转导通路起负调作用.然而,抑制PTPase的活性却可以阻断IL-2对TNF-β基因和c-myc基因转录的激活,并导致细胞死亡.因此,PTPase在IL-2诱导的不同信号转导通路中分别起正调和负调作用,这两种作用都是通过它的酯酶活性来实现的. 相似文献
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江浙蝮蛇神经生长因子在大肠杆菌中的表达及纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
将江浙蝮蛇(AgkistrodonhalysPalas,A.h.P.)神经生长因子(Nervegrowthfactor,NGF)基因克隆于分泌型原核表达载体pET22b+,以C端融合了6个组氨酸的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析确定有一比理论值略大的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的20%左右,且表达蛋白质主要是以包涵体的形式存在。用6mol/L的盐酸胍溶解包涵体后,利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析一步纯化目的蛋白质,纯度可达80%左右。对该重组肽进行变复性研究。利用PC12细胞进行生物活力测定,证明表达产物具有NGF生物活力。 相似文献