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在活体小鼠中筛选IZP3基因RNAi有效靶位点的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3 gene of Lagurus lagurus,IZP3)的mRNA,选择了针对IZP3 mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对IZP3 mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-IZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics—based transfection method,HD法)共注射小鼠,半定量RT—PCR和real—timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中IZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰IZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hel。细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰IZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。 相似文献
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在活体小鼠中筛选lZP3基因RNAi有效靶位点的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-basedtransfectionmethod,HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。 相似文献
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