原癌基因c-erbB_2在原始卵泡启动生长中的作用

目的:探讨原癌基因c-erbB2在原始卵泡启动生长中表达变化及可能的作用。方法:选用2日龄SD大鼠卵巢在Waymouth培养体系中进行体外培养,用原位杂交、RT-PCR和免疫组化方法检测c-erbB2mRNA和蛋白在原始卵泡启动生长中及在表皮生长因子(EGF)作用下的表达情况,用Westernblot方法同步测定卵泡活化生长的重要标志物——增殖细胞核抗原(PCNA)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)的表达情况,并分析p-ERK1/2与c-erbB2mRNA表达变化的相关关系。结果:伴随原始卵泡启动生长过程,PCNA表达逐渐增加,EGF能促进原始卵泡的增殖和分化;原始卵泡中有c-erbB2mRNA及蛋白的表达,且随原始卵泡的启动生长及在EGF作用下表达增强;RT-PCR结果显示,c-erbB2mRNA表达在2日龄大鼠卵巢培养8d后与培养0d相比显著增加(0.297±0.018vs0.178±0.011,P0.05),并在EGF作用下进一步增强;p-ERK1/2含量的变化与c-erbB2mRNA表达的变化呈显著的正相关关系(rs=0.900,P0.05)。结论:c-erbB2在原始卵泡启动生长中起重要促进作用,并为介导EGF促进原始卵泡启动生长的关键信号分子;ERK-MAPK信号通路可能在介导c-erbB2调控原始卵泡生长中起作用。     

内皮素—1对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞产生孕酮的影响

本文用离体细胞体外孵育法研究了内皮素－１（ＥＴ）对大鼠排卵前卵泡颗粒细胞孕酮生成的影响及其作用机理。结果发现,ＥＴ能显著抑制ｈＣＧ刺激下的孕酮产生,抑制作用在浓度为１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,即有显著意义（Ｐ＜０．０５,ｎ＝６）,至１０－７ｍｏｌ／Ｌ时则有非常显著的意义（Ｐ＜０．０１,ｎ＝６）;不同浓度ＥＴ（１０－７—１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,对颗粒细胞基础孕酮的产生无明显影响。进一步研究表明,ＥＴ对ｈＣＧ刺激下孕酮生成的抑制作用,在用免抗人内皮素抗血清（ＥＴ－Ａ）１：１０００及ｃＡＭＰ后能明显被逆转。实验中还观察到,ＥＴ使颗粒细胞ＬＨ／ｈＣＧ受体数下降,亲和力降低。本文结果提示,ＥＴ可能为卵巢内的一种局部调节肽,通过作用于ＥＴ受体,干扰ＬＨ／ｈＣＧ受体功能和ｃＡＭＰ生成而抑制颗粒细胞孕酮的产生。     

c—fos,c—myb和c—erbB—2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调？…

目的和方法：用离体细胞体外孵育法,观察肥义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２寡脱氧核苷酸（ｃ－ｆｏｓ ＯＤＮ、ｃ－ｍｙｂ ＯＤＮ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ）对ｈＣＧ诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响。同时观察内皮素－１、γ－氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的影响。结果：反义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｂ和ｃ－ｅｒｂＢ－２ ＯＤＮ均明显抑制ｈＣＧ诱导颗     

Hippo信号通路在雌性生殖系统中的研究进展

Hippo信号通路是一条存在于果蝇属和哺乳动物体内的保守且新兴的信号通路,具有复杂多变的特点。该通路由多种抑癌基因和一种原癌基因组成,与其他信号通路存在诸多交联对话。Hippo信号通路具有调控器官大小、参与调节细胞周期和凋亡及维持内环境稳定等生物学效应。近年来已有研究表明,Hippo信号通路参与雌性生殖系统发育的调控,因此,其在生殖系统发育及疾病治疗中的作用逐渐引起人们的广泛关注。该文综合论述了Hippo信号通路的生理特性及功能,着重阐述其在雌性生殖系统主要生殖器官(如卵巢、乳腺及卵泡等)中的调控机制。     

c-fos、c-myb和c-erbB-2与大鼠卵巢颗粒细胞生孕酮调控关系的研究

目的和方法:用离体细胞体外孵育法,观察反义c-fos、c-myb和c-erbB-2 寡脱氧核苷酸(c-fos ODN、c-myb ODN和c-erbB-2 ODN)对hCG诱导大鼠颗粒细胞孕酮产生的影响,同时观察内皮素-1、γ-氨基丁酸和钙离子通道阻断剂维拉帕米对颗粒细胞中c -fos、c-myb和c-erbB-2蛋白的影响.结果:反义c-fos、c-myb和c-erbB -2 ODN均明显抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生,并伴有各自癌基因蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降;而无义tat ODN没有相应的作用.2×10-7mol/L内皮素-1和5×10 -6mol/L γ-氨基丁酸能显著抑制hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生,同时使c-fos、c-my b和c-erbB-2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率下降;而1×10-6mol/L维拉帕米对hCG 诱导颗粒细胞孕酮的产生和c-fos、c-myb和c-erbB-2蛋白染色阳性的颗粒细胞百分率均无明显影响.结论:c-fos、c-myb和c-erbB-2与hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生密切相关;内皮素-1、γ-氢基丁酸能通过调节这些癌基因在颗粒细胞中的表达而影响hCG诱导颗粒细胞孕酮的产生;而Ca2+无相应的作用.     

Hippo信号通路主要分子与卵巢生殖干细胞相关因子在人和小鼠卵巢衰退过程中的表达相关

本研究旨在探讨Hippo信号通路的主要分子与卵巢生殖干细胞(ovarian germline stem cell, OGSC)相关因子在人和小鼠衰老不同功能状态卵巢中表达的相关性。选择2月龄性成熟期(正常对照)、12月龄衰老期(生理性衰退) KM系小鼠卵巢,以及青年期(青春期后～35岁)、中年期(36～50岁)和绝经期(51～60岁)女性卵巢皮层样本;采用环磷酰胺/马利兰片(cyclophosphamide/busulfan, CY/BUS)腹腔注射方式构建小鼠病理性衰退卵巢模型,用HE染色法检测各级卵泡的变化,用免疫组织化学法和免疫荧光染色法检测Hippo信号分子与OGSC相关因子(MVH/OCT4)的定位和表达变化,用Western blot检测Hippo信号通路的主要分子和OGSC相关因子的蛋白表达水平。结果显示,在生理性和病理性衰退模型小鼠卵巢中已无正常卵泡,仅有一些闭锁卵泡存在;和正常对照小鼠相比,生理性和病理性衰退模型小鼠卵巢皮层Hippo信号通路的主要分子(pYAP1)和MVH/OCT4蛋白表达水平均显著降低,病理性衰退模型小鼠卵巢皮层pYAP1/YAP1比值升高。和青年期女性相比,中年期和绝经期女性卵巢表面上皮(ovarian surface epithelium, OSE)结构逐渐变得松散,皮层处细胞也逐渐减少;LATS2蛋白表达水平在青年期女性OSE最高,MST1蛋白表达水平在老年期女性OSE最低,而YAP1和pYAP1蛋白表达水平在中年期女性OSE最高;相比青年期女性,中年期和老年期OSE的pYAP1/YAP1比值显著降低,而二者之间无显著性差异。青年期女性OSE中MVH蛋白表达水平显著高于中年期和老年期。以上结果表明,Hippo信号通路的主要分子与OGSC相关因子的蛋白表达之间有相关性,提示Hippo信号通路可能调控OGSC相关因子表达,从而参与卵巢功能的生理性衰退和病理性衰退过程。     

Notch信号通路与生殖干细胞研究进展

Notch信号通路是一个在进化中高度保守的信号通道,具有调控细胞增殖、分化及凋亡的作用。近年来,随着研究的不断深入,发现Notch信号通路与生殖干细胞的增殖分化及干细胞微环境的作用机理密切关联,Notch信号通路在生殖系统发育及疾病治疗中的作用机制逐渐引起人们的广泛关注。该文综合论述了Notch信号通路的生理特性及功能,重点阐述Notch信号通路在精原干细胞、卵巢生殖干细胞及生殖干细胞微环境系统中的调控机制。     

壳寡糖对病理性卵巢衰退小鼠免疫功能和生殖功能的作用

目的：探讨壳寡糖促进病理性卵巢功能衰退小鼠生殖功能和免疫功能恢复的可能性。方法：选用43只生育旺盛期雌性小鼠,除正常对照组（n=8）外,其它通过白消安/环磷酰胺构建病理性卵巢功能衰退模型模拟卵巢功能早衰,随机选取3只,卵巢切片HE染色观察卵泡情况以判断不孕模型。构建成功后将余下32只随机平均分为4组（n=8）,经不同剂量壳寡糖（0,100,200,300 mg/（kg·d））灌胃后,比较组间卵巢、脾脏、胸腺脏体比的变化,观察卵泡情况、检测腹腔巨噬细胞吞噬能力、外周血雌二醇（E₂）及孕酮（P）水平,检测卵巢生殖上皮细胞中生殖细胞标志物小鼠血管同源物（MVH）、干细胞标志物OCT-4以及卵巢中免疫因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）表达量的变化,并分析生殖干细胞标记物表达水平变化与免疫因子表达水平变化的相关关系。结果：随壳寡糖灌胃剂量的增加,卵巢、脾脏和胸腺脏体比同步增高;卵巢中总卵泡数及各级卵泡数都呈递增趋势;外周血E2水平递增,P水平呈递减趋势;腹腔巨噬细胞吞噬功能随剂量增高而增强;生殖干细胞标记物和免疫因子的表达水平均呈显著递增趋势,表明生殖干细胞标记物的表达水平与免疫因子表达水平的变化呈显著的正相关关系（P < 0.05）。结论：壳寡糖可改善病理性卵巢功能早衰小鼠的免疫功能,促进雌性生殖干细胞增殖、分化,从而促进卵巢病理性早衰机体生殖功能在一定程度上的恢复。     

柑橘黄龙病寄主长春花内生细菌的分离及功能鉴定

【目的】感柑橘黄龙病长春花植株与健康长春花植株不同部位内生细菌菌群结构及功能对柑橘黄龙病菌与长春花内生细菌的相关性研究提供理论基础。【方法】利用兼性厌氧可培养技术以及植物内生菌功能特性分析相结合的方法。【结果】分别从感病和健康长春花叶、茎、根的组织中分离获得67株内生细菌,与GenBank中29种细菌的相似性达到97%-100%。其中短小杆菌属(Curtobacterium sp.)、欧文氏菌属(Erwinia sp.)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)为感病长春花内生细菌的优势菌群,鞘胺醇单胞菌属(Brevundimonas sp.)、芽胞杆菌属(Bacillus sp.)为健康长春花内生细菌的优势菌群;马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)为两者的共同优势菌群。29种内生细菌进行功能分析,其中6株内生细菌至少具有4种功能特性,分属于马胃葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小杆菌属、摩氏摩根菌(Morganella morganii)及溶杆菌属(Lysobacter sp.)5个属。【结论】感病与健康长春花植株中均含有丰富的内生细菌且差异较大,黄龙病菌的存在改变了长春花原有内生细菌的菌群结构。通过分析菌群的差异,有望找到与柑橘黄龙病菌生长相关的菌种。     

下丘脑促性腺激素释放激素及其类似物对卵巢的作用

下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)及其类似物(GnRH-激动剂,GnRH-A)能直接作用于卵巢。对卵巢的各个成份、颗粒细胞、黄体细胞、内膜/间质细胞、卵子均有作用。本文着重介绍了 GnRH 和 GnRH-A 对卵巢的作用与其作用机制。