DAPI染色法在流式细胞术中去除死细胞影响的探讨

目的:探索利用DAPI染色法在流式细胞检测过程中去除死细胞,消除死细胞对流式结果的影响。方法:建立原位肝癌小鼠模型,流式检测其中死细胞对脾脏中骨髓来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)结果的影响,并以碘化丙啶(propidiumiodide,PI)为对照,探索不同DAPI浓度、不同染色时间对死细胞比例的影响。结果:流式细胞术中去除死细胞影响时DAPI染色浓度低于1 g/m L时,其染色结果影响不大,浓度大于1 g/m L,死细胞比例明显升高;当DAPI使用浓度为0.2 g/m L时,在30钟内死细胞染色结果与PI相比差别无统计学差异,当染色时间大于30 min时,死细胞的比例显著升高。结论:DAPI染色法应用于流式细胞术中去除死细胞是一种可靠的检测方法,且简单易行,推荐使用方法为0.2 g/m L,染色时间1-5 min。     

HMGB1在自身免疫和炎症疾病中的作用及研究进展

高迁移率族蛋白1 (High Mobility Group Box-1 Protein,HMGB1)是一种细胞核内的非组蛋白,其作为促炎介质或预警蛋白可以诱导自身免疫和炎症疾病的发生.HMGB1通常位于细胞核内,在细胞活化和死亡时,可以转运到细胞质或胞外基质中.细胞活化过程中,HMGB1经历了翻译后修饰,活性会随着半胱氨酸残基的氧化态变化而变化.HMGB1能直接作用于细胞,也能与细胞因子或其他内外源性因子形成免疫调控复合物间接作用于细胞.对于风湿性关节炎,关节滑液中胞核外的HMGB1表达上升,对HMGB1进行阻断可以减轻疾病的症状.对于牙周炎,牙龈组织中HMGB1呈高表达,并与炎症因子的释放相关.总之,HMGB1可能作为一种重要的促炎介质或预警蛋白出现在自身免疫和炎症疾病中,有望成为新的治疗靶点.     

脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-21的表达变化

目的:了解脂肪基质细胞(ADSCs)在脂向分化过程中MicroRNA-21(miRNA-21)表达变化情况.方法:从8只出生30 d雄性体健SD幼鼠体内取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞,采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养,并以未诱导的细胞为对照.成脂诱导培养液[DMEM培养液中加入地塞米松(1 μmol·L-1)、3-异丁基-1甲基黄嘌呤(0.5 mmol.L-1)、胰岛素(10 mg·L-1)].应用microRNA芯片技术检测脂肪基质细胞脂向诱导后7 d和未诱导microRNA-21的表达差异.采用实时定量PCR检测microRNA-21在脂肪基质细胞脂向分化前后表达量变化.结果:经显微镜下观察、油红O染色及PPARγ免疫细胞化学染色检测证实脂肪基质细胞已经脂向分化,miRNA芯片及实时定量PCR结果均表明miRNA-21在脂肪基质细胞体外脂向分化过程中表达显著下调.结论:miRNA-21在脂肪基质细胞脂向分化后的表达有显著降低,可能参与调控ADSCs的脂向分化过程.     

肠球菌溶血及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞表达TNF-a的影响

【目的】探讨肠球菌溶血菌株及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞RAW264.7表达TNF-а的影响。【方法】用多粘菌素B抑制排除内毒素污染对实验的影响。肠球菌溶血菌株、非溶血菌株各11株,以菌/细胞比 30∶1 感染RAW264.7细胞1 h,加入200 mg/mL氨苄青霉素继续培养24 h,分别于感染后3、6、9、24 h,用ELISA方法检测不同观测点细胞培养液中肿瘤坏死因子TNF-a的含量,并用逆转录-聚合酶链反应方法（RT-PCR）比较肠球菌溶血、非溶血菌株感染6 h后TNF-a mRNA表达的差异。【结果】未感染的RAW264.7细胞培养液中检测不到TNF-a。肠球菌溶血株感染组细胞培养上清液中各观测点的TNF-a的平均含量 (pg/mL) 均比非溶血株性组高。经t检验,P<0.01,差别有显著性。RT-PCR法检测其mRNA的表达也有相同结果：TNF-a mRNA在肠球菌溶血株感染细胞中的相对表达量比非溶血株感染的细胞高,经t检验,P<0.05,差别有统计学意义。【结论】肠球菌溶血株比非溶血株更能促进小鼠巨噬细胞RAW264.7产生TNF-а炎症因子。     

463例口腔颌面部间隙感染临床病例的回顾性研究

目的:分析口腔颌面部间隙感染的临床特点、诊治要点、病原菌的分布情况以及抗生素使用时长的影响因素。方法:回顾性研究四川大学华西口腔医院2009年至2013年收治的463例颌面部间隙感染患者的临床资料,对性别、入院年龄、体温、入院白细胞数、感染来源、是否进行细菌培养、住院时长等数据进行统计学分析。结果:463例患者的年龄为1~82岁,平均年龄47岁;男性265人(57.24%),女性198人(42.76%);大多数患者平均入院体温、入院时白细胞数、入院中性粒细胞百分数均高于正常值。进行分泌物细菌学培养的患者206人(44.49%),在送检的206份标本中,细菌培养结果阳性的有127例,阴性的79例,感染细菌大部分为链球菌属。抗生素使用时长与患者的年龄、抗生素使用种类、细菌培养结果、是否伴有基础疾病等因素均有显著相关性(P0.05)。结论:患者入院体温、白细胞数、中性粒细胞百分比仍为临床诊治感染的重要指征。及时行脓肿切开引流对控制间隙感染有重要意义;积极进行分泌物细菌培养,对选择正确的抗生素及减少抗生素的使用时长具有指导价值。     

肠球菌溶血及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞表达TNF-α的影响

【目的】探讨肠球菌溶血菌株及非溶血菌株对小鼠巨噬细胞RAW264．7表达TNF-α的影响。【方法】用多粘菌素B抑制排除内毒素污染对实验的影响。肠球菌溶血菌株、非溶血菌株各11株,以菌／细胞比30：1感染RAW264．7细胞1h,加入200gg／mL氨苄青霉素继续培养24h,分别于感染后3、6、9、24h,用ELISA方法检测不同观测点细胞培养液中肿瘤坏死因子TNF-α的含量,并用逆转录-聚合酶链反应方法（RT-PCR）比较肠球菌溶血、非溶血菌株感染6h后TNF-α RNA表达的差异。【结果】未感染的RAW264．7细胞培养液中检测不到TNF-α。肠球菌溶血株感染组细胞培养上清液中各观测点的TNF-α的平均含量（pg／mL）均比非溶血株性组高。经t检验,P〈0．01,差别有显著性。RT-PCR法检测其mRNA的表达也有相同结果：TNF-α RNA在肠球菌溶血株感染细胞中的相对表达量比非溶血株感染的细胞高,经t检验,P〈0．05,差别有统计学意义。【结论】肠球菌溶血株比非溶血株更能促进小鼠巨噬细胞RAW264．7产生TNF-α炎症因子。     

三叉神经痛的临床治疗进展

三叉神经痛是一种常见的面部疼痛性疾病,目前对其病因的认识并不明确。普遍认为压迫可导致三叉神经痛,致病原因包括血管因素和非血管因素,其次创伤也可导致三叉神经痛,常见于口腔外科手术后。三叉神经痛的治疗方法较多,首选药物治疗,包括全身用药和局部用药,药物治疗初期效果明显,但很难治愈三叉神经痛,而且需要长期服药,副作用较大,当药物治疗无效或者患者难以耐受其副作用时,可采用外科疗法进行辅助治疗。三叉神经痛的外科疗法主要包括无创的微血管减压术及有创的射频热凝术、球囊压迫术和甘油毁损术。近年来采用放射外科对三叉神经痛进行治疗,取得了确切效果。此外,还有一些关于其他治疗方法的文献报道,均有一定效果。本文对三叉神经痛病因的认识及临床治疗进展作一回顾性综述。     

225例髁突骨折病例的回顾性研究

目的:总结髁突骨折治疗方法选择的原则和适应征,为髁突骨折的治疗提供参考依据.方法:对225例髁突骨折住院病例进行回顾性分析,对患者的受伤年龄、性别、受伤原因、部位、合并损伤、治疗方法、疗效等方面进行分析.结果:髁突骨折多见于20-49岁男性,交通伤害的成年患者的常见病因,跌落损伤是小孩和老人患者的常见病因.骨折常发生在髁突颈,多合并颌面部其他部位骨折.高位骨折和(或)没有明显移位的骨折常采用保守治疗,中低位骨折和(或)有明显移位的骨折常采用手术治疗.结论:髁突骨折的高发人群是青壮年,最常见的致病因素为交通伤;现阶段髁突骨折的治疗方法主要有保守治疗和手术治疗,治疗方法的选择跟患者年龄、骨折部位和移位程度相关.     

下颌骨牵张成骨中不同牵张频率对牵张区成骨细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:对比研究下颌骨牵张成骨中不同牵张频率的作用下新骨组织中成骨细胞的增殖活性,从而筛选出最佳牵张频率。方法:选用16只3月龄的幼年山羊,随机分为4组,每组4只,第1组为对照组,分别对第2、3、4组动物右下颌骨行骨皮质切开术后进行牵张,第2组牵张频率为2次/天,第3组牵张频率为4次/天,第4组牵张频率为6次/天,于完成牵张后4周时分别处死动物,取牵张区新骨组织和对照组右下颌骨颏孔区骨组织行PCNA免疫组化染色并进行组间比较。结果:各牵张组牵张区新生骨组织中成骨细胞PCNA表达的阳性细胞数均显著高于对照组,6次/天牵张组和4次/天牵张组牵张区中成骨细胞PCNA表达的阳性细胞数显著高于2次/天牵张组,但6次/天牵张组和4次/天牵张组成骨细胞PCNA表达的阳性细胞数无显著性差异。结论:在下颌骨牵张成骨进程中,随着牵张频率的增加,牵张区成骨细胞的增殖能力提高,可能术后成骨效果更佳。     

caveolin-1 mRNA在小鼠牙发育过程中的表达

目的:检测caveolin-1基因mRNA在小鼠牙发育不同时期间充质细胞中的表达,初步探讨caveolin-1在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:以E9.5第一鳃弓间充质细胞及E16.5下颌第一磨牙牙胚细胞作为研究发育机制的模型,应用RT-PCR技术检测caveolin-1 mRNA的表达。结果:caveolin-1 mRNA在两种细胞中均有表达,其在牙胚细胞中的表达水平高于第一鳃弓间充质细胞。结论:caveolin-1可能在牙发育过程中发挥作用。