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转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
主要采用了绝对定量PCR和热不均一交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR),检测了体细胞核移植技术生产的绿色荧光蛋白转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点,并利用旁侧PCR(Junction PCR)对整合位点进行确定,同时进一步分析了整合位点的纯合性.结果表明,绝对定量PCR可以准确有效地检测外源基因拷贝数,标准曲线为:log2N (拷贝数) =-0.935 4ΔCt + 3.411 6 (R2=0.997 4,P < 0.001),两只转基因猪中外源基因拷贝数分别为30.85 ± 1.77和18.87 ± 1.34;TAIL-PCR能成功地克隆转基因猪中外源基因整合位点,得到25条特异性条带,经BLAST比对,共获得TgInS1 (1 440 bp)、TgInS2 (1 263 bp)和TgInS3 (1 861 bp) 3个整合位点.以整合位点侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合引发Junction PCR,得到预计大小的特异性片段,确定了整合位点上、下游侧翼序列的准确性.采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合,进行Junction PCR,在两只转基因猪中都得到与野生型猪一致的侧翼序列特异性引物扩增片段,表明我们获得的转基因猪都为整合位点杂合子.初步建立了绝对定量PCR和TAIL-PCR对外源基因拷贝数和整合位点检测的体系,为今后研究外源基因在转基因猪中遗传和表达的稳定性打下了基础. 相似文献
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本文采用14种拟南芥转基因报告株系,研究了对映-贝壳杉烷二萜(leukamenin E)调节拟南芥根部生长素极性运输转运蛋白表达并影响根生长发育的机制。结果表明:leukamenin E浓度在20~40μmol·L~(-1)范围显著抑制拟南芥幼苗主根的生长,较低浓度leukamenin E(10μmol·L~(-1))促进侧根提前发生并增加侧根数量; 10~30μmol·L-1的leukamenin E在处理拟南芥幼苗48 h后可显著提高其根尖部生长素水平;进一步检测根部生长素极性运输转运蛋白表达,发现该浓度条件下leukamenin E促进PIN1在转录水平表达并增加其蛋白丰度,但在转录水平抑制PIN2表达并减少其蛋白丰度;同时,显著减少PIN3、PIN7和PIN4蛋白在小柱和静止中心及其周围细胞的丰度以及AUX1的定位丰度; Leukamenin E对PIN1丰度的上调以及对PIN2、PIN3、PIN4、PIN7和AUX1定位丰度的减少可导致生长素在根尖顶部的积累以及根部生长素浓度梯度的改变,引起根生长的抑制及侧根的提前发生。 相似文献
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近年来逆境导致植物雌雄幼苗的生长出现差异被许多控制实验所证实, 而有关气候变化对雌雄异株植物成树生长的潜在影响尚未引起人们广泛的关注。为进一步揭示气候变化对雌雄植株树木径向和密度生长的不同影响, 该文通过树轮生态学的研究方法, 选择小五台山天然青杨(Populus cathayana)种群为研究对象, 对青杨雌雄植株近30年(1982-2011)的树轮生长特性及其与气候的相关性进行了分析。结果显示: 1)在近30年当地气温不断升高的气候条件下, 雌株的年轮最大密度和晚材平均密度均高于雄株(p < 0.05), 但雌雄植株的径向生长无显著差异; 2)雌雄植株年轮最大密度和宽度差值年表的变化趋势具有一致性, 但在年轮最大密度差值年表的变化上雄株波动幅度大于雌株; 3)青杨雌雄植株年轮密度差值年表对温度响应的月份明显不同。雌株年轮最大密度与当年8月的月平均最高气温显著正相关, 而雄株年轮最大密度与当年1月和4月的气温负相关; 4)生长季前的气候变化对青杨雌雄植株的径向生长均有明显的限制作用。此外, 当年6月的高温对于早材生长的限制作用特别明显。上述结果表明, 雌雄异株植物在树木年轮生长方面对全球气候变暖可能具有不同的响应机制, 雌株比雄株更侧重于密度生长。 相似文献
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抑郁作为帕金森病最为常见的非运动症状, 具有患病率高, 起病隐匿等特点, 不仅造成患者生活质量的降低, 也给病情的控制造成很大困难, 因此加强对此病的研究尤为必要。对于帕金森病并发抑郁症的治疗, 目前多采用对症治疗的方案, 将抗帕金森病与抗抑郁症相联合, 忽视了抑郁症作为帕金森病的并发症, 双方必然存在内在联系。研究发现肠道菌群失调会导致抑郁症的发生, 而帕金森病患者体内肠道微生态明显失衡, 因此本文提出肠道菌群失调可能是帕金森病并发抑郁症发生的关键影响因素。肠道菌群失调会导致血清素能系统异常、炎症反应和脑源性神经营养因子缺乏, 从而造成抑郁症的发生, 因此认为调节肠道菌群可能成为治疗帕金森病并发抑郁症的新方向。
相似文献5.
生物标志物是和疾病相关的可监测的变化.尿液因其不受人体稳态调节而比血液更富于变化,是早期、敏感的生物标志物来源.尿液由于受到的各种因素的影响,变化极其复杂,一个排除这些影响的方法就是在动物模型上控制其他影响因素,单独观察每个应用因素的作用,找到与疾病直接相关的尿液变化,并且在选择需要验证的疾病候选标志物时应该考虑是不是已经被发现受到一些常见因素的影响,最后再在临床样本上验证找到的尿液标志物线索与人类疾病的关系.本文拟通过列表形式展示疾病候选标志物受影响因素(生理因素、药理因素)影响的情况,提示验证疾病候选标志物时应该慎重考虑这些蛋白,减少验证的成本和精力,以期更有效地建立起人类疾病与其尿液标志物的相对特异的关系. 相似文献
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病害问题是制约我国扇贝养殖业发展的关键, 因此贝类的先天免疫也成为当前研究的热点。丝氨酸蛋白酶是先天免疫中至关重要的酶类,在许多通路中起信号放大作用。目前对栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶的研究主要集中于基因序列分析和表达谱研究, 基因定位方面的研究尚未开展。文章以包含一种栉孔扇贝丝氨酸蛋白酶基因的BAC克隆为探针, 利用BAC-FISH技术将其定位到一对同源染色体的长臂上, 为丝氨酸蛋白酶基因的后续研究提供了基础; 同时, 利用PCR产物直接测序法筛选了该基因内部的6个SNP标记, 这些SNP标记可供遗传图谱定位使用, 从而可以实现遗传图谱与染色体间的锚定与初步整合 相似文献
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抑郁症作为2型糖尿病常见并发症,不仅严重危害人体的健康,而且增加了疾病的治疗难度。临床中对于本病的治疗通常将二者分开,采用降糖与抗抑郁联合的方法,却忽视了抑郁症作为2型糖尿病的并发症,两者必定存在内在联系。研究表明,2型糖尿病患者肠道菌群存在明显失衡,而肠道菌群与抑郁症的发生密切相关,因此肠道菌群可能在2型糖尿病并发抑郁症中起着重要作用,本文通过论述三者的关系,认为肠道菌群失调可能是糖尿病并发抑郁症的关键因素,提出肠道菌群可能是干预2型糖尿病并发抑郁的新靶点,以期为2型糖尿病并发抑郁症的治疗提供新的途径。 相似文献
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糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)作为2型糖尿病后期最常见和最具代表性的微血管并发症之一,不仅是慢性肾脏疾病的主要病因之一,也是糖尿病患者死亡的主要原因,长期以来一直受到人们的关注。但当今的临床研究和诊断方法已不能满足疾病年轻化的需要。故寻找更为快捷、全面和准确的早期诊断指标及缓解后期病情进一步发展显得尤为重要。现有大量的研究结果表明肠道微生态紊乱与DN的发生发展有密切联系,故本文就肠道微生态紊乱与糖尿病肾病发生发展的关系作一综述,以期为临床诊断与治疗提供理论依据、思路和方法。 相似文献
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植物叶片的消荧光现象 总被引:3,自引:0,他引:3
实验观察表明,非生物体有消荧光现象,生物体也有消荧光现象.它是激光与物体表面非线性相互作用的结果.植物叶片的消荧光现象是一个多光子过程,并且荧光消失过程伴随二次谐波产生.荧光消失过程中,荧光能量部分地转换为二次谐波信号,经粗略计算,转换效率大约为2.2%. 相似文献