池蝶蚌HsPif基因的克隆及表达分析

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)酸性基质蛋白Pif基因的基本功能,研究通过RACE-PCR技术首次在池蝶蚌中获得了Pif基因的cDNA全长序列,命名为HsPif,其全长为3457 bp, 5′端非翻译区(5′UTR)为485 bp,3′端非翻译区(3′UTR)为363 bp,开放阅读框(ORF)3072 bp,共编码1023个氨基酸,生物信息学分析结果显示HsPif蛋白含有一个von-Willebrand因子A型结构域和三个几丁质结合结构域;氨基酸组成成分结果表明天冬氨酸含量最高,组氨酸含量最低; HsPif蛋白亲水指数为–0.566,为亲水蛋白。构建系统进化树分析显示Pif基因保守性较高,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Pif相似度最高,且与其他贝类在同一个大支上。组织荧光定量PCR结果表明:HsPif基因主要在外套膜中表达;分子原位杂交显示杂交反应主要在外套膜上皮细胞发生。进行植核手术后进行qPCR检测HsPif基因的表达量变化,实验结果表明, HsPif基因可能与珍珠层的分泌有关,有助于进一步了解珍珠形成的机制,为珍珠养殖提供参考。     

人工选育池蝶蚌的生长及不同世代遗传分析

对引进后的池蝶蚌原种及其选育后代的形态和生长进行了研究,并利用RAPD技术,对原种、F1代、F2代和F3代的遗传特征进行分析,以期了解选育的效果.结果表明,人工选育的池蝶蚌后代具有生长更快、育珠能力更强的发育趋势.经过选育后,F3代较F2代的生长速度更快,壳的厚度更大,更适合育珠.RAPD结果显示,10个随机引物可产生稳定的可重复的多态性扩增结果,共检测出45条扩增带,池蝶蚌四代间的遗传多样性相差不显著,遗传分化水平较低,表明池蝶蚌经人工选育后与生长相关的等位基因频率有较大提高,遗传性状趋于稳定.     

池蝶蚌胚胎发育与繁殖季节性腺的观察

以池蝶蚌(Hyriopsis schlegeli)育儿囊中单细胞胚胎为材料,通过连续观察、人工体外培养等方法,对繁殖季节池蝶蚌的生殖腺特性、生殖细胞形态、胚胎发育过程等进行了观察.结果表明,年满4冬龄池蝶蚌卵巢的相对怀卵量为(2.25±1.09)×103粒/g,绝对怀卵量为1.93×104～1.03 × 105粒;性腺指数为24.09%±0.33%;在体外用自制培养液培养的胚胎,部分能正常分裂发育至桑椹期,其胚胎发育过程经历了4个时期,即卵裂期、囊胚期、原肠期、钩介幼虫期.在18～23℃的水温下,胚胎发育历时约12 d;胚胎发育的最适水温为20～30℃.此外,通过池蝶蚌外鳃的特征可初步判断胚胎发育的时期.研究结果可为池蝶蚌人工繁殖、新品种培育及种质资源保护等提供理论依据.