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日本蟳高血糖激素基因的克隆与表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica高血糖激素基因(CjCHH)全长cDNA序列;运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析该基因的组织差异性表达;利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明:CjCHH cDNA全长1754 bp,包含111bp的5’末端非编码区(UTR),423 bp的开放阅读框(ORF),以及1236 bp的3’UTR,该基因可编码140个氨基酸。序列比对结果显示:CjCHH的成熟肽序列与其它甲壳动物CHH的一致性为41%~88%。系统进化树显示:CjCHH与其它梭子蟹科的CHH聚在一起,这与日本蟳所处的分类地位一致。组织差异性表达研究显示:CjCHH在检测的10个组织中均有表达,其中眼柄中表达量最高,肠和Y-器次之,其余组织表达量较低。成功构建了CjCHH重组表达质粒pET-CHH,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中获得了高效表达,重组蛋白的相对分子量约11 kDa,与预测的相对分子质量大小相一致,表达水平在5 h的IPTG诱导过程中呈现上升趋势。 相似文献
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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)诱发的一种使特定基因沉默的现象。作为一种研究基因功能、发现新基因和抗病毒的新型手段,近年来RNAi技术在昆虫、真菌、植物和哺乳动物等的研究中已被广泛应用,但是在甲壳动物研究中尚处于起步阶段。对甲壳动物RNAi技术实施方法做了简要介绍;着重综述了RNAi技术在甲壳动物CHH家族神经肽类基因功能、蜕皮和生长调控机制、配子及性腺发育调控和甲壳动物抗病毒机制研究上的应用进展。 相似文献
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