Sfrp1通过阻断Wnt信号通路减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心脏损伤并促进自噬的研究

摘要 目的：本研究旨在评估Sfrp1在血管紧张素II诱导的心肌肥厚中的心脏保护作用，并探讨其与自噬和Wnt信号通路相关的可能机制。方法：利用重组AAV9载体将Sfrp1导入Ang II诱导的肥厚型H9C2心肌细胞。用CCK8测定细胞活力。流式细胞仪检测细胞凋亡率。用显微照片记录肥厚细胞大小的变化。western blot检测Sfrp1、Bcl-2、Bax、CytC、Caspase-3、P62、ATG5、Beclin、LC3、β-catenin和DVL1的蛋白表达。通过qRT-PCR检测β-连环蛋白和DVL1的mRNA表达。自噬抑制剂3-MA也用于验证治疗过程中自噬的参与。结果：（1）Sfrp1成功转染H9C2细胞，其过度表达减轻了心肌肥厚。（2）经过AAV9-Sfrp1预处理可减少肥厚心肌的细胞凋亡，可逆转Ang II组自噬相关蛋白（p62、ATG5、Beclin、LC3）的表达；（3）自噬在治疗心肌肥厚过程中的作用通过可自噬抑制剂3-MA来证实。（4）激活的Wnt信号（β-连环蛋白，DVL1）也被AAV9-Sfrp1抑制。结论：Sfrp1通过Wnt信号通路促进细胞自噬，从而保护心肌细胞免受肥厚性损伤和凋亡，这为Sfrp1对心肌肥厚的心肌保护作用机制提供了一个重要的视角。     

缩短5′-UTR序列可以提高hGH基因在昆虫细胞中的表达

人生长激素是一种由大脑基部垂体前叶分泌合成的多肽类激素 ,其分子量为 2 1 5ｋＤ ,由 191个氨基酸组成。生长激素的功能非常广泛 ,它能刺激骨和软骨的生长 ,器官的发育 ,它还具有维持人体正常代谢 ,如促进ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成 ,分解脂肪 ,提高血糖水平 ,增加基础代谢 ,改善免疫功能和保护健康组织等功能[1 ] 。Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ系统是最新发展的昆虫细胞 杆状病毒表达系统之一[2 ] ,是利用转移载体ｐＦａｓｔＢａｃ1转化含有杆状病毒穿梭载体Ｂａｃｍｉｄ的大肠杆菌ＤＨ10Ｂａｃ ,外源基因通过位点特异性转座作用整合到Ｂａｃｍ…     

用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达人生长激素

利用Bac to Bac杆状病毒载体表达系统将人生长激素 (humangrowthhormone ,hGH)基因cDNA克隆至转移载体pFastBac1中 ,得到pFastBac hGH ,再将其转化进入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中 ,发生转座作用 ,得到含hGH基因的重组穿梭载体rBacmid hGH .纯化DNA ,直接转染培养的昆虫细胞Sf9,得到重组病毒rAcV Bac hGH .经酶切PCR及Southern杂交鉴定 ,hGH基因正确地插入病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下 ,SDS PAGE测得产物蛋白分子量为 2 2kD左右 .用免疫化学发光法测得转染上清中hGH表达水平可达 18μg ml ,与用传统的BEVS表达hGH相比 ,转染上清中hGH表达水平提高 4 0 0倍以上     

缩短5＇-UTR序列可以提高hGH基因在昆虫细胞中的表达

人生长激素是一种由大脑基部垂体前叶分泌合成的多肽类激素,其分子量为21.5kD,由191个氨基酸组成.生长激素的功能非常广泛,它能刺激骨和软骨的生长,器官的发育,它还具有维持人体正常代谢,如促进DNA、RNA和蛋白质合成,分解脂肪,提高血糖水平,增加基础代谢,改善免疫功能和保护健康组织等功能[1].     

缩短5′UTR序列可以提高hGH基因在昆虫细胞中的表达

The regulation of foreign gene expression in Insect-Baculovirus Expression System is very complex. In this report, the effect of 5'-UTR in the expression of hGH gene in cultured Sf9 cells was examined. A 18 bp length in the end of 5'-UTR of hGH (human Growth Hormone, hGH) cDNA including a stem-loop structure was deleted by PCR. The truncated hGH cDNA, delta 1hGH was cloned in pFastBac1, named pFast-Bac-delta 1hGH. After transforming into E. coli. DH10Bac, which have a shuttle vetor-Bacmid, the delta 1hGH was integrated into Bacmid by site-specific transposition, and an expression vector, rBacmid-delta 1hGH DNA was acquired. By transfecting the cultured Sf9 cells with the recombinant expression vector DNA, pure recombinant virus, rAcV-Bac-delta 1hGH was obtained, and hGH gene was expressed. Immuno-blot and Chemiluminescent assay revealed that the expressed hGH had normal immunological activity, the amount of hGH expression level in Sf9 cell supernatant infected with rAcV-Bac-delta 1hGH containing the truncated 5'UTR was four to five times higher than that infected with rAcV-Bac-hGH.