表皮生长因子受体基因突变检测方法改进及初步临床验证

目的:改进现有的检测表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的荧光PCR法并开发出新的试剂盒,将其与直接测序法和ARMS法进行对比,验证该试剂盒用于临床诊断的敏感性、特异性和准确性。方法:收集2013年6月至2015年8月手术确诊的141例非小细胞肺癌(NSCLC)的石蜡包埋组织标本。采用盲法分别使用直接测序法、ARMS法和新试剂盒检测EGFR突变,比较新试剂盒与其他两种检测方法的差异,结果不一致时采用三种方法分别重复检验一次。结果:三种方法检测成功率均为100%,新试剂盒与直接测序法测得结果完全一致的比率达75.9%(107/141),在直接测序法测得的96例突变阳性中,92例在新试剂盒检测中得到验证(95.8%)。而直接测序法显示突变阴性的45例中,新试剂盒检测发现了23例突变阳性,两种检测方法的结果存在统计学差异(x2=40.745,P0.05)。与直接测序法进行比较,新试剂盒检测EGFR突变的敏感性、特异性分别为95.8%、48.9%,阳性预测值、阴性预测值分别为80.0%、84.6%,检测准确度为80.9%。以ARMS检测法为金标准,新试剂盒测得结果完全一致的比率达84.4%(119/141),两者的一致性比较好(K=0.749,P0.05),敏感性、特异性分别为94.1%、86.4%。结论:改进后EGFR基因突变检测的试剂盒在技术上较好地控制了检测结果的假阳性和假阴性,该检测方法较直接测序法具有更好的敏感性和准确性,与现有的ARMS法一致性较高。     

大肠杆菌与绿脓杆菌原生质球融合的研究

本实验利用在细菌学分类上不属同一科的大肠杆菌与绿脓杆菌原生质球的融合方法,使二种细菌发生融合和染色体重组,并通过重组体与亲本菌株遗传标记的差异来选育新重组菌株。实验中由于绿脓杆菌原生质球形成率低,适应性强,对多数抗菌素耐药。我们利用聚蔗糖—泛影葡胺分层液将活菌体与原生质球分开。并通过热处理使未与大肠杆菌杂交的绿脓杆菌原生质球在MD_3培养基中不能复原再生。为提高细菌细胞融合率及简化融合体筛选方法提供了有效的手段。通过实验结果证明所选育的二株融合体兼有二种亲本菌种的遗传性状,说明二种细菌细胞发生了融合和染色体重组。应用细菌原生质球的融合方法,使异种细菌进行杂交重组,组建一株兼备二株细菌性状的重组体,不仅为遗传育种提供一有效方法,也为异种细菌间传递质粒提供了新手段。     

单相动作电位技术在猫在体心脏触发性活动研究中的应用

应用接触电极记录心脏单相动作电位(MAP)是80年代发展起来的新技术。MAP是心肌局部细胞群的电活动,它与单细胞跨膜动作电位(TAP)具有基本相同的形态、间期和复极化过程。自1985年开始,很多研究者将其用于在体心脏触发性活动的研究。触发性活动是近年来提出的心律失常发生机制的新概念,包括早期后去极化(EAD)、延时性     

蓖麻蚕血球细胞的体外培养及其病毒感染试验

蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricini Donovan)由本所昆虫饲养室提供。选择健康的5龄幼虫,饥饿24小时,先用自来水洗净虫体,将幼虫放入75％乙醇中浸泡20—30分钟,体表消毒,取出幼虫以灭菌的双重蒸馏水和Hanks液各洗涤2次,置幼虫于已灭菌的滤纸平皿中,吸干体表水分。剪脚部采血,直接滴入预先盛有2毫升培养液的扁瓶中,每瓶采血1—2滴,加盖橡皮塞,轻微摇动瓶子,使培养瓶内的细胞均匀悬浮于     

长豇豆（Vigna sesquipedalis）生物学特性观察

豇豆近年来公认原产于热带西非(原生中心)和印度次大陆(次生中心)。种子含蛋白质25.0%,在豆类中仅次于大豆,比牛肉、猪肉和鸡肉的蛋白质含量都要高。鲜果含86%的水,3.3%的蛋白质,7.5%的碳水化合物,是广大人民喜爱的蔬菜。我国通常作蔬菜栽培的是长豇豆,又名豆角,其生物学特性的记载并不详尽。为此,我们对长豇豆作了进一步系统的观察,为育种和丰产栽培提供了必要的理论依据。     

化石之最

地球上最古老的生物为非洲南部阿扎尼亚昂威尔瓦赫特群中的球形、椭球形化石,直径只有2—6u,时代为距今37—34亿年前,被称为“伊索拉姆原始细菌”,是地球生命的始祖;在该群之上的无花果树群中产的直径为10—     

介绍一点打猎经验

我愿意把我学得的一点打猎的常识献给为了实习或是为了获取兽类标本而暂时从事打猎的人们。打猎必须经过找兽迹、放猎犬、扎线口、鸣猎枪四个或者三、二至少是一个阶段。现在来依次加以介绍。一、找兽迹猎兽初,当你还不能肯定山里有无兽类存在,但为了有把握地围猎野兽,就得先找野兽的行迹。在自然界里,有不少野兽是以庄稼为食的。因而可到庄稼地里去找。到山林里的小道上去固然可以找到兽迹,但不如耕地里面的清楚易见;同时,庄稼地比山路要好走一些。但在收藏季节,当然只有到山路上去找,因为野     

叶龄及树冠不同部位光强对黄花梨光合速率的影响

笔者以黄花梨为试材,研究了叶龄及树冠不同部位光强对其光合速率的影响。结果表明:黄花梨叶片在展叶后约11天即有少量光合产物输出,25天时,单叶净光合速率接近最大值;密植梨树高光合叶幕厚度约125cm左右。     

用免疫荧光单克隆抗体对脊髓灰质炎病毒抗原表位的分析

用间接免疫荧光与中和试验筛选出来的抗脊髓灰质炎2型与3型不同毒株的12个单克隆抗体,其中3个仅有免疫荧光活性,9个具有中和与免疫荧光活性。用免疫荧光活性的单克隆抗体进行试验,发现它们在识别特异性抗原表位方面与中和性单克隆抗体相似,显示出株特异的、几个毒株共同特异的或型特异的抗原表位。根据表位分布关系及特征,可以用来鉴别型内毒株的特征、毒株的抗原分析、抗原变异的研究以及疫苗相关病例的鉴别。所得结果与中和性单克抗隆抗体及T1-寡核苷酸指纹图谱分析一致。而免疫荧光单克隆抗体识别抗原表位的活性范围比中和性单克隆抗体更广。另外还发现某些兼有荧光与中和两活性的同一个单克隆抗体,用不同方法(IF与NT)进行试验时,与相同毒株出现不同表位反应,这点是值得引起注意需待进一步证实的重要问题。