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以本实验室建立的CSFV39-PKl5持续感染细胞模型为实验材料,综合运用免疫荧光、RT-PCR、流式细胞仪,对其稳定性进行研究。实验结果均表明,该细胞模型有着良好的稳定性。即使在连续传至128代的CSFV39-PKl5传代细胞中,CSFV仍持续存在:呈免疫荧光抗体反应阳性和RT-PCR检测阳性。同时,该细胞与正常的PK-15细胞相比,细胞周期无显著差异。通过同段序列的同源性比较,发现CSFV39与CSFV石门株的同源性最高,达99.02%。 相似文献
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黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H 5N1禽流感病毒感染 总被引:3,自引:0,他引:3
我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制,本研究选取黑色素及谷胱甘肽(GSH)为候选药物,通过Hoechst 33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化;细胞凋亡流式细胞术定量分析表明,H5N1 AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡,而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01);当20 μg/ml黑色素及10 mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89% (P <0.01);采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率;病毒血凝素(Ha)基因的RT-PCR检测结果表明,黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01);一氧化氮(NO)毛细管电泳(CE)激光诱导荧光检测显示,黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05);RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶(cyclooxygenase-2, COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明,黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达 (P<0.05),并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01),从而可有效抑制H5N1 AIV感染. 相似文献
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