RGD-葡激酶的凝胶过滤层析法复性及其纯化

构建的溶栓和抗栓双重功能的RGD-葡激酶突变体(RGD-Sak)在大肠杆菌中高表达,目的蛋白质以包涵体形式存在。为获得有活性的蛋白质,需要对包涵体进行变复性。利用凝胶层析方法对包涵体中RGD-Sak进行复性,并与稀释复性法进行比较,发现凝胶柱复性方法具有操作周期短、简便、成本低而高效等优点。复性后蛋白质用Q-Sepharose FF离子交换进一步纯化,纯度达95%,酪蛋白凝胶板活性测定表明两种复性法得到的蛋白质比活性相当。圆二色谱测定显示两种复性法得到的蛋白质的二级结构成份和谱形一致,说明在两种复性过程中完成了RGD-Sak分子的正确折叠。     

转NAS基因冷季型草坪草的生长及抗旱性研究

采用盆栽法,在干旱胁迫下,测定转基因草坪草与对照株在不同水分胁迫下的根系活力、脯胺酸含量、叶绿素含量和SOD酶活性等抗旱生理指标.以期综合评价该转基因草坪草的抗旱性能和所选指标作为筛选抗旱性指标的可行性.结果表明,转基因草坪草在抗旱性能上普遍优于对照株.同时,SOD酶活性和脯胺酸含量可以作为转基因草坪草抗旱性鉴定指标;根系活力和叶绿素含量为参考指标.     

负压封闭引流技术与传统打包技术治疗四肢软组织损伤及后期植皮的临床疗效比较

目的:观察和比较负压引流技术(vacuum sealing drainage,VSD)与传统打包技术治疗四肢软组织损伤及后期植皮的临床疗效。方法:选择2010年1月-2013年1月在我院分别接受负压引流技术(实验组)及常规打包技术(对照组)治疗的随访资料完整的四肢软组织损伤患者共127例。记录和比较两组患者的手术时间、住院时间、创面愈合时间、换药次数和并发症的发生情况等。结果:实验组的手术时间、住院时间、创面愈合时间、平均手术次数和换药次数均明显短于或少于对照组(P0.05)。两组术后创面感染的发生情况比较无统计学差异,经再次清创后感染控制,行植皮手术后恢复良好。结论:与传统的打包技术比较,VSD技术用于治疗软组织损伤及后期植皮,可以更有效地缩短手术和住院时间及减少手术次数,是一种治疗四肢软组织损伤的安全有效的方法。     

植物抗旱基因及其在草坪草中的应用

从植物抗旱的生物学原理、渗透调节物质、清除活性氧、保护生物大分子及其膜结构的蛋白质、转录因子及其他酶类的基因工程等方面综述了目前抗旱基因研究的进展以及存在的一些问题。     

人类组织特异性DNA聚合酶POLλ2基因的克隆、表达纯化和鉴定

发现并克隆了一个肝脏特异的人类DNA聚合酶基因, 是POLλ的一个剪接体, 命名为POLλ2. 该剪接本的cDNA长2206 bp, 包含一个1452 bp的开放阅读框, 编码482个氨基酸, 位于人10号染色体长臂24区, 长约7.9 kb, 包含8个外显子和7个内含子. 生物信息学分析表明, POLλ2蛋白和DNA聚合酶X家族成员高度同源, 并含有这个家族特有结构域POLx, 因此是一个DNA聚合酶X家族的新成员. 该剪接本的核苷酸序列和相应蛋白质氨基酸序列已提交至GenBank, 登录号为AY302442. 亚细胞定位实验证实, POLl2蛋白定位于细胞核; 人16种组织表达谱实验表明, POLl2在肝组织和睾丸组织中特异性高表达, 在卵巢组织中低表达, 而在其他组织中没有检测到表达. 癌和癌旁表达实验表明, 与正常肝组织和癌旁组织相比, 在15个肝癌组织的样本中有80%样本的POLλ上调表达, 导致POLλ2 和POLλ的mRNA分子的比例异常, 可能和肝癌的病理过程有关. 通过筛选菌株, E.coli BL21(DE3)CONDON Plus可以高效地表达可溶性POLλ2蛋白; 通过Ni-NTA resin 和Superdex-75纯化了POLλ2重组蛋白. 经过同位素α-32P-dCTP掺入实验, 证实了POLλ2具有DNA聚合酶活性.