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根据几种丝状真菌Hog1 MAPK的保守氨基酸序列设计简并引物,从昆虫病原真菌球孢白僵菌中扩增出MAPK同源基因的部分片段,然后利用YADE法延伸该片段的上、下游邻接序列,获得MAPK编码基因的全长序列,命名为BbHog1。序列分析表明,该基因编码358个氨基酸的多肽,推测分子量为40.99kDa,等电点为5.49。BbHog1含有MAPK保守的蛋白激酶激活域(TGY),序列与粗糙脉孢霉os-2(AF297032)、烟曲霉OSM1(XM_747571)、隐球酵母HOG1(AF243531)和酿酒酵母Hog1(Z73285)等Hog1 MAPK高度同源,相似性分别为94%、89%、83%和80%。系统聚类结果表明,BbHog1与酵母Hog1 MAPK同源。Southern杂交表明,BbHog1在球孢白僵菌基因组中以单拷贝形式存在。Northern分析表明,BbHog1在高渗、亚高温和营养胁迫等条件下的表达明显升高。由此推测,BbHog1基因可能与球孢白僵菌对逆境胁迫的适应性调节密切相关。 相似文献
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经过 75 %饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG 75凝胶过滤层析、Lys Sepharose 4B亲和层析和电泳制备洗脱 ,从华广虻 (TabanusamaenusWalker)腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 6 7KD的溶纤活性蛋白TAFP。经纤维蛋白平板测定表明 ,TAFP不仅具有纤溶酶作用 ,还具有激活纤溶酶原的作用 ;通过三肽生色底物测定发现 ,TAFP能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—ChromozymUK及S 2 2 88。还能水解胰蛋白酶专一底物Bz Phe Val Arg NA及CBZ Gly Pro Arg NA ,表明TAFP具有类胰蛋白酶活性 ,专一水解精氨酸形成的酰胺键 (或肽键 )。TAFP无胰凝乳蛋白酶活性 相似文献
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抗真菌多肽APS-1的分离纯化与特性 总被引:12,自引:0,他引:12
蜡状芽孢杆菌(Baciluscereus)S1菌株对多种作物真菌性病害有良好的防效。本文报道了S1菌株产生的抗真菌物质的纯化及其部分特性。该菌株的发酵液经过酸沉淀和有机溶剂抽提、SephadexG100与DEAE52柱层析等步骤后,抗真菌物质得到纯化,硅胶薄层层析显色为单点。该物质在275nm处有吸收峰,对蛋白酶有一定耐受性,茚三酮反应呈阴性,但酸水解后,茚三酮反应呈阳性,双缩脲反应也呈阳性。氨基酸组分分析结果表明,该物质由谷氨酸、天门冬氨酸、酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和一种异常氨基酸组成。推测该物质为一种环状多肽,命名为APS1。紫外光照射和高压灭菌处理后,APS1的抗真菌活性损失不大。平板抑菌试验结果表明,APS1对9种供试真菌的孢子萌发有抑制作用,其完全抑制浓度因真菌种类不同而有差异 相似文献
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球孢白僵菌高渗适应性相关基因Bbmpd的克隆与表达分析 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】克隆与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的高渗适应性相关基因,并对其功能进行分析,以揭示球孢白僵菌对高渗等逆境适应的分子机理。【方法】利用YADE法克隆T-DNA的侧翼序列并进行基因组步行,获得突变基因的全长及上游序列;利用RT-PCR技术分析突变基因的表达特性以及与Bbhog1的关系;采用同源重组技术敲除Bbmpd基因。【结果】克隆得到插入突变基因及其上、下游序列全长3037bp。该基因与编码球孢白僵菌的1-磷酸甘露醇脱氢酶基因相似性为98%。Bbmpd的表达受高渗环境(0.8mol/L NaCl)的诱导,受Bbhog1信号途径的激活调节,Bbhog1缺失导致Bbmpd表达下调。Bbmpd缺失突变体在高渗胁迫下的生长受到明显抑制。Bbmpd缺失不影响球孢白僵菌在查氏培养基上的生长和产孢。【结论】由T-DNA突变体克隆了编码球孢白僵菌1-磷酸甘露醇脱氢酶基因Bbmpd,该基因的表达受高渗环境的诱导和Bbhog1的调控,与球孢白僵菌高渗适应性相关。 相似文献
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麻蝇和丽蝇幼虫肠道主要蛋白酶活性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白酶是昆虫肠道的重要消化酶类[1]。研究表明,蛋白酶抑制剂能够抑制昆虫肠道蛋白酶活性,使昆虫生长发育不良甚至死亡,在害虫防治中显示出应用潜力[2~4]。但是,要选择有效的蛋白酶抑制剂,最首要的工作是研究昆虫肠道蛋白酶的特性[5]。蝇类是重要的卫生害虫,确定其肠道蛋白酶的类型,了解其肠道蛋白酶的特性,对蝇类的防治有重要意义。本文以棕尾别麻蝇Boettcheriscaperegrina和巨尾阿丽蝇Aldrichinagrahami为材料,分析了其肠道蛋白酶同工酶,鉴定了其肠道主要蛋白酶活性类型,并… 相似文献
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棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性 总被引:1,自引:0,他引:1
用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同:乳糖、岩藻糖和N-乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。 相似文献
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小麦遗传转化研究进展 总被引:4,自引:1,他引:3
小麦 (TriticumasetiumL)是世界上分布最广 ,种植面积最大的粮食作物之一 ,传统的小麦育种方法主要是利用远缘杂交技术来提高小麦品质和产量 ,然而有限的可利用的种质资源常常限制了育种工作的突破。基因工程技术的发展和应用 ,打破了物种间的界限 ,增加了小麦外源基因导入的途径和范围 ,对小麦育种有着深远意义。自 80年代以来 ,虽然许多植物包括重要农作物水稻和玉米的遗传转化工作发展得很快 ,但小麦近几年才取得成功。这主要是由于农杆菌宿主的限制以及小麦原生质体培养的艰难性制约了小麦遗传转化的发展。经过多年的不… 相似文献
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李德谋 罗小英 侯磊 裴炎 方卫国 杨光伟LI De-mou LUO Xiao-ying HOU Lei PEI Yan FANG Wei-guo YANG Guang-wei 《遗传》2001,23(6):553-331
交错延伸剪接PCR是一种用于分子进化研究的DNA改组技术.本实验利用其原理,将已获得的油菜花粉育性基因MS2Bnap有部分序列重叠的三段PCR产物作为模板进行扩增,获得了花粉育性基因MS2Bnap的全长cDNA序列。
Abstract:SOE by PCR is one of DNA shuffling technologies for molecular evolution engineering.Using the theory of SOE by PCR,the full-length cDNA sequence of pollen fertility gene MS2Bnap of Brasscia napus was amplified with three obtained fragments as templates which have part overlapping of MS2Bnap sequence. 相似文献
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利用YADE法进行棉花基因组PCR步行 总被引:38,自引:4,他引:34
设计了一种依靠“Y”形接头延伸未知序列的方法(YADE,Y-shaped Adaptor Dependant Extension),成功地抑制了在未知序列圹增中的单引物扩增。用这种方法从棉花基因组中扩增了一个棉花胚珠cDNA片段F027的相邻序列--FP27S和FP27A。重叠分析表明,F027S与F027有104bp的重叠,FP27A与F027有175bp的重叠。两个延伸片段分别含有1和3个可能的内含子,内含子均具有保守的边界序列GT-AG和与哺乳动物类似的分枝点序列。还对YADE法扩增未知序列的优缺点和可能的改进作了进一步讨论。 相似文献