缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）在大肠杆菌中…

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＡＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合Ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螯合新和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基     

人红细胞生成素受体的研究进展

人红细胞生成素受体(hEPOR)是位于相对成熟阶段人体红系祖细胞表面的跨膜蛋白,它能专一性结合人红细胞生成素(hEPO),将促进细胞生长、增殖和分化的信号传导到膜内,该过程涉及了hEPOR自身及部分相关蛋白的磷酸化.hEPOR具有一些与其功能相关的保守结构,它的氨基酸序列与鼠EPOR(mEPOP)高度同源.EPOR因为膜外R129C突变或结合特定蛋白质而具有组成型活性.EPOR还与红白血病等多种血液病密切相关.     

人尿激酶原（pro－urokinase）基因在大肠杆菌中的高效表达

本文用ＰＣＲ方法对人工合成的尿激酶原。ＤＮＡ基因５’端进行改造,将之克隆到表达载体ｐＫＫ２３３－２中,转化大肠杆菌ＪＡ２２１,经ＩＰＴＧ诱导,获得了占总菌体蛋白１５％的高表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示表达产物主要为单链尿激酶,并且在菌体内基本上以无活性的包含体形式存在。经体外交复性,从１升培养基中可获得３０００００单位的活性尿激酶原。     

缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）在大肠杆菌中的表达

本文用聚合酶链反应（ＰＣＲ）获得了一个缩短的人巨噬细胞集落刺激因子（编码３～１４９氨基酸）ｃＤＮＡ基因,并克隆在质粒ｐＥＴ３ｄ中,在Ｔ７启动子指导下,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＥ中获得了和一个６组氨酸短肽标签的融合表达。重组的融合ｍ－ＣＳＦ表达量占菌体总蛋白的１２％,表达产物一部分以不溶性包涵体形式存在,另一部分则以可溶性蛋白存在。经过金属螫合亲和层析一步纯化,所得的融合（Ｈｉｓ）６－Ｍ－ＣＳＦ在还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上基本呈一条均一的蛋白质条带。     

XTH基因家族在‘妃子笑'荔枝花穗不同处理方式的表达分析

木葡聚糖内切葡聚糖酶/水解酶(xyloglucan endotransglucosylase/hydrolase,XTH)是一类重要的糖苷水解酶,在促进植物细胞壁延展以及响应逆境胁迫方面发挥着重要作用。为研究荔枝XTH家族基因在不同花穗处理方式下的表达情况,该文以‘妃子笑’荔枝为实验材料,对‘妃子笑’花穗进行疏花和喷施烯效唑处理;基于前期转录组数据库鉴定出29个LcXTH家族成员,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术对LcXTH基因家族成员在不同处理后花穗的表达进行研究,分析XTH家族基因对不同花穗处理方式的响应情况。结果表明:LcXTH家族基因成员表达在对照、疏花处理和烯效唑处理后花穗不同发育阶段表达规律不同,且不同基因存在表达量的差异。其中LcXTH亚家族Ⅲ、LcXTH亚家族Ⅳ(LcXTH2、LcXTH3、LcXTH4、LcXTH5、LcXTH6、LcXTH7、LcXTH9、LcXTH10、LcXTH11、LcXTH12、LcXTH13、LcXTH22和LcXTH23)成员及LcXTH20表达量较高,推测在花穗发育中起关键作用。‘妃子笑’花穗疏花处理14 d后LcXTH家族大部分成员表达上调,推测疏花对LcXTH的表达起到正调控作用;‘妃子笑’花穗喷施烯效唑后LcXTH家族成员的表达下调,推测烯效唑处理对LcXTH的表达起到负调控作用。     

药用植物大戟的快速繁殖研究

以野生大戟为材料,探讨了大戟茎尖扦插繁殖和组织培养等快速繁殖技术的条件。结果表明:大戟茎 尖扦插繁殖,其成活率可以达到88.6%,用含有腋芽的茎在MS培养基上培养,发芽比例可以达到55%;用愈 伤组织诱导生芽,最高可以达到12%。嫩芽在不含激素的1/2MS培养基中培养,生根率达到47.1%。幼苗 接种本源的或同科外源植物5株内生真菌,比较其生长表明,接种大戟来源的两株内生真菌全苗重分别达到 对照的1.51和2.08倍,根重达到对照的2.09和3.68倍,最有利于宿主生长。     

戊型肝炎病毒通用性PCR引物的设计及其基因分型的研究

针对戊型肝炎病毒(HEV)基因分型尚无统一标准的现状,本研究通过分析GenBank中现有的82株HEV基因组全序列,设计一组HEV通用性PCR引物(HEVuPrimer)用于扩增不同基因型HEV可测序长片段,分别基于全基因序列、HEVuPrimer扩增序列和较常用的MXJ引物扩增序列对82株HEV进行基因分型,再以HEVuPrimer扩增1～4型HEV参考株和HEVIg M抗体阳性的临床标本,进行HEV基因分型的研究。研究结果表明HE-VuPrimer扩增区段与全基因序列对82株HEV的基因分型结果完全一致;HEVuPrimer与HEV序列的匹配程度明显高于MXJ引物,且HEVuPrimer区段的基因分型结果较MXJ区段的更为准确。HEVuPrimer可同时扩增出不同基因型HEV基因片段。124份临床标本中,60份测出特异性HEV RNA,阳性率为48.4%,基因分型结果均为4型HEV,但分属于4个不同的基因亚型,核苷酸同源性为80.0%～99.9%,其中有6例近期分离的HEV毒株形成一新的基因亚型。因此,基于HEVuPrimer扩增区段的HEV基因分型方法具有较高的可靠性和可信度,为建立统一、可行的HEV基...     

GPRP－scu－PA（144－411）的基因构建及其性质研究

本文将人工合成的编码ＧＰＲＰ四肽的亥核苷酸序列连接至ｓｃｕ－ＰＡ（１４４－４１１）ｃＤＮＡ的５’端,并将它重组克隆到表达载体ｐＫＫ２３３－２中,在大肠杆菌中得到５％的表达量。表达产物经亲和层析得到纯化,并测得其Ｋｍ为４０ｍｏｌ／Ｌ。体外纤溶效率为ＬＵＫ的２－３倍,对纤维蛋白的亲和性比ＬＵＫ提高了６倍,并且对纤维蛋白原的亲和力很低。以上结果表明ＧＰＲＰ四肽可以提高尿激酶对纤维蛋白的专一亲和性。     

戊型肝炎病毒第Ⅳ基因型特异性抗原表位的鉴定与定位

目的 研究戊型肝炎病毒(HEV)第Ⅳ基因型中国株开放阅读框架(ORF)2编码蛋白p166Chn的抗原表位特征.方法 制备HEV ORF2重组衣壳蛋白p166Chn的特异性单克隆抗体(McAb),进行中和活性鉴定,并利用7种HEV不同基因型p166重组蛋白以及22种N端或C端逐步截短的p166Chn进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,确定McAb所识别抗原表位的性质和位置.结果 获得1株稳定分泌HEV McAb的杂交瘤细胞株,命名为B4.该McAb不与其他基因型p166重组蛋白反应,不能中和HEV对培养细胞的感染性,也不能竞争抑制已知中和性McAb与抗原p166Chn的结合,表明McAb B4所针对的抗原表位是HEV第Ⅳ基因型特异的非中和性抗原表位.此外,McAb B4能与截短蛋白pN452、pN460、pN462、pN463、pN464、pN465、pN466、pN468、pN470和pN472发生阳性反应,而与pN482、pN492、pC587、pC597、pC599、pC600、pC601、pC603、pC605、pC607、pN465-C601和pN460-C605均不反应.表明其可识别的抗原表位位于472～617位氨基酸,而且N端第472～482位氨基酸以及C端第607～617位氨基酸的1个或多个氨基酸对构成该抗原表位起着重要作用.结论 所发现的HEV第Ⅳ基因型特异性抗原表位是1个非中和性的构象依赖性表位,可定位于pORF2的第472～617位氨基酸.     

GPRP—scu—PA（144—411）的基因构建及其性质研究

本文将人工合成的编码ＧＰＲＰ四伏的寡核甙酸序列连接 ｓｃｕ－ＰＡｃＤＮＡ的５’端,并将它重组克隆到表达载体ｐＫＫＫ２３３－２中,在大肠杆菌中得到５％表达量。表达产物经亲和层析得到纯化,并测得其Ｋｍ为４０μｍｏｌ／Ｌ。体外纤咬继ＬＵＫ的２－３倍,对纤维蛋白的亲和性比ＬＵＫ提高了６倍,并且对纤维蛋白原的亲和力很低。