MHC II类四聚体技术研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)在免疫应答的启动和免疫调控中发挥重要作用。MHC II类四聚体技术是检测CD4+T细胞的直接有效的特异方法,目前已成为研究T细胞免疫应答的重要技术之一。就MHC II类四聚体技术的基本原理及制备,以及在病毒、免疫监控、自身免疫性疾病、肿瘤治疗等研究领域的应用作综述。     

抗原处理相关转运体蛋白的研究进展

抗原处理相关转运体(transporter associated with antigen processing,TAP)蛋白在抗原提呈途径中发挥重要作用,它负责将内源性抗原从胞浆运送到内质网(endoplasmic reticulum,ER),以便主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I结合多肽。TAP属于ATP结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运蛋白超家族B族,是由TAP1和TAP2两个亚基构成的异二聚体蛋白,其每个亚基各含有一个亲水的核酸结合区和一个疏水的跨膜结构域,并具有促进肽段转运的结构域。TAP参与MHC I类分子的组装,并在人获得性免疫系统中起着至关重要的作用。TAP基因具有多态性,因而增加了个体对疾病的易感性。TAP基因的突变及其调节机制的缺陷都可以导致其活性和表达下调,从而影响病毒性感染和肿瘤等疾病的发生。     

MHCI类分子四聚体技术的应用研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)I类分子四聚体(tetramer)技术可直接对抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)进行标记,以检测能够识别特定抗原肽-MHC I的CTL,用于临床检测、疾病诊断及相关科学研究。综述了MHC I四聚体技术应用的最新研究进展,为开展四聚体的相关研究提供新的参考。     

地方三品系猪SLA-1原核表达载体构建及表达研究

目的:为研究我国地方三品系猪SLA-1原核表达。方法:选取3个国内地方品系猪荷包、烟台黑猪及莱芜黑猪的SLA-1等位基因,PCR扩增地方品系猪SLA-1胞外区基因,再将胞外区基因克隆至pMD19-T Simple Vector,阳性重组子经过酶切,然后连接至pET-21a载体,构建其原核表达载体,并转化宿主菌BL21进行诱导表达。结果:PCR结果显示三个品系猪SLA-1胞外区大小约840bp,经克隆后成功连接至pMD19-T Simple Vector,经酶切回收后插入片段又成功连接至pET-21a载体,并在BL21成功表达,表达蛋白大小约31 kDa,与设计值大小相符。蛋白表达量约5%。结论:该研究成功表达了我国三个地方品系猪SLA-1胞外区,为下一步研究其空间结构及功能奠定基础。     

烟台黑猪SLA-I重链基因末端生物素修饰及表达

为构建烟台黑猪SLA-2重链基因偶合生物素化酶BirA底物肽(BirA substrate peptide,BSP)并研究其在pET-28a(+)中的表达,设计烟台黑猪SLA-2-BSP复合基因引物,PCR扩增烟台黑猪SLA-2-YTH-BSP复合基因,并克隆至pMD 19-T Simple Vectorp,经酶切鉴定后将SLA-2-YTH-BSP复合基因与表达系统pET-28a(+)链接,并转化到BL21(Rosseta)菌进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。表达蛋白经过Ni-NTA亲和纯化,并经SDS-PAGE检测蛋白纯化效果。PCR结果显示SLA-2-BSP大小为900 bp,并成功克隆到pMD 19-T Simple Vector,酶切鉴定大小为876 bp,该基因链接到pET-28a(+)并转化到BL21(Rosseta)菌,经诱导表达和SDS-PAGE检测目的蛋白的大小为32.4 kD。目的蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达到90%以上。成功构建烟台黑猪SLA-I重链偶合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的pET-28a(+)的重组表达系,为下一步的SLA-I类分子四聚体研究鉴定基础。