一种受抗生素诱导的启动子的构建及活性分析

多聚ADP核糖聚合酶（PARP）受基因毒剂的特异性诱导。将拟南芥（Arabidopsis thaliana）AtPARP1基因上游长2179bp的启动子片段插入到质粒pAKK687的β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）报告基因上游,转化拟南芥。GUS组织化学染色结果表明,GUS报告基因仅在苗龄3-5天的拟南芥根部及花发育早期的雄蕊中表达;1.5μg.mL-1博莱霉素与22μg.mL-1丝裂霉素联用强烈诱导了GUS报告基因的表达（尤其在拟南芥的幼苗和果荚中）。进一步降低抗生素浓度,发现单独使用1μg.mL-1博莱霉素对GUS报告基因也具较强的诱导活性,且对拟南芥幼苗的生长无影响。上述结果表明,AtPARP1启动子是一个新型的具较大应用潜力的抗生素诱导型启动子。     

非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较

对水稻非特异性脂质转移蛋白(Nospecific lipid transfer protein,nsLTP) LTP110中结构重要的5个氨基酸位点进行了定点突变,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合于LTP110野生型及突变体的表达。将编码野生型LTP110及突变体Y17A,P72L,R46A,D45A,C50A蛋白的cDNA顺序克隆进两种硫氧还蛋白表达载体并对其表达情况进行了比较：pTrxFus载体可以在宿主菌GI724中以较低水平表达野生型LTP110及突变体Y17A,P72L,R46A融合蛋白,但不能表达D45A和C50A融合蛋白;pET32a(+)载体可以在宿主菌BL21 (DE3) trxB-中以可溶蛋白的形式表达野生型及所有突变型融合蛋白,且表达量比在pTrxFus载体/GI724突主菌中表达量高。对pET32a(+)载体中表达的LTP110融合蛋白进行了纯化,并利用带有荧光标记的脂肪酸分子对其测活,结果表明表达的野生型LTP110分子具有结合脂质的活性。     

水稻非特异性脂质转移蛋白的原核表达、纯化及抑菌功能

将编码水稻非特异性脂质转移蛋白 (nonspecificlipidtransferprotein ,nsLTP)基因 (LTP110 )的克隆到硫氧还蛋白融合表达载体PET32a( )中 ,在BL2 1(DE3)trxB-宿主菌中实现了融合蛋白的高表达。通过Ni2 chelatingSepharosefastflow柱纯化融合蛋白后 ,通过肠激酶酶切再过该亲和柱得到了重组LTP110。CD谱扫描表明重组蛋白质与体内提取的nsLTP二级结构相似 ;荧光脂质结合实验表明该蛋白质具有结合脂肪酸分子的活性。对该蛋白质的抑菌功能进行研究后表明 ,LTP110具有抑制稻瘟病菌孢子萌发的功能 ,在较低浓度即能发挥活性     

拟南芥多聚ADP核糖水解酶在ATM和ATR依赖的DNA损伤信号途径中的作用分析

DNA损伤响应是生物体感知DNA断裂并启动DNA修复过程的重要机制,对维护遗传物质的稳定性具有重要的意义.DNA损伤响应机制中有多种蛋白的参与.多聚ADP核糖水解酶(PARG)是参与蛋白质多聚ADP核糖化(poly(ADP-ribosyl)ation)修饰调控过程的一种重要酶,它通过水解去除蛋白质上的多聚ADP核糖来调节靶蛋白质的生理生化活性.目前已知多聚ADP核糖修饰相关蛋白可能通过修饰DNA修复相关蛋白参与DNA损伤反应,但其影响的信号途径和上下游关系并不清楚.本研究通过双突变体构建、遗传以及表达谱分析,揭示了PARG1可能在DNA损伤响应途径关键激酶ATM和ATR的上游,通过调节ATM和ATR的活性来反馈调节DNA损伤信号途径.     

水稻中一个人类肿瘤抑制基因同源物的克隆与表达分析

用同源筛选方法,从水稻 (Oryza sativa L.) 基因组文库中分离到一个与人类肿瘤抑制基因QM具有同源性的基因,命名为OSQM1.该基因包括4个外显子和3个内含子,编码219个氨基酸,其中有46个碱性氨基酸,其等电点高达11.02.同源性搜寻发现此基因存在于真核生物中而且保守性较强,表明它可能具有重要的作用.Northern分析结果表明,它在不同的水稻器官中都有表达,但在花和愈伤组织中的表达水平明显低于其他营养器官.它在根和叶中的表达水平受环境因素的影响.     

拟南芥多聚ADP核糖聚合酶Ⅰ的原核表达与活性检测

采用RT-PCR技术获得了拟南芥多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]PARP1基因的全长cDNA,转入原核表达载体pET32a并转化宿主菌Origami(DE3),加入终浓度为0.3mmol/L IPTG,在16℃下诱导可获得较多的可溶重组蛋白。纯化TRX-PARP1,在反应液中加入NAD+和断裂DNA,通过SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可随着时间的延长逐渐增大,产生向上的弥散,表明蛋白质连上了ADP核糖分子;与此对比,作为参照的标签蛋白TRX无此现象。实验结果显示原核表达拟南芥PARP1能够催化自身多聚ADP核糖化修饰,为深入研究植物多聚ADP核糖聚合酶的功能奠定了基础。     

水稻中一个人类肿瘤抑制基因同源物的克隆与表达分析(英)

用同源筛选方法 ,从水稻 (OryzasativaL .)基因组文库中分离到一个与人类肿瘤抑制基因QM具有同源性的基因 ,命名为OSQM1。该基因包括 4个外显子和 3个内含子 ,编码 2 19个氨基酸 ,其中有 4 6个碱性氨基酸 ,其等电点高达 11.0 2。同源性搜寻发现此基因存在于真核生物中而且保守性较强 ,表明它可能具有重要的作用。North ern分析结果表明 ,它在不同的水稻器官中都有表达 ,但在花和愈伤组织中的表达水平明显低于其他营养器官。它在根和叶中的表达水平受环境因素的影响。     

水稻中一个人类肿瘤抑制基因同源物的克隆与表达分析

用同源筛选方法,从水稻（Oryza sativa L.）基因组库中分离到一个与人类肿瘤抑制基因QM具有同源性的基因,命名为OSQM1,该基因包括4个外显子和3个内含子,编码219个氨基酸,其中有46个碱性氨基酸,其等电点高达11.02。同源性搜寻发现此基因存在于真核生物中保守性较强,表明它可能具有重要的作用,North-ern分析结果表明,它在不同的水稻器官中都有表达,但在花和愈伤组织中的表达水平明显低于其他营养器官,它在根和叶中的表达水平受环境因素的影响。     

水稻脂质转移蛋白cDNA结构及相应肽链构造特征的分析

从水稻(Oryza sativa L.ssp.indica)“广陆矮4号”黄化苗cDNA库中分离到一个与其它植物脂质转移蛋白(LTP)基因同源性很高的cDNA克隆(pFDRSC144)。完成了pFDRSC144克隆中840bp插入片段全顺序的测定。结果表明,该片段包含354个碱基的编码区,编码118个氨基酸,其中包括26个氨基酸组成的信号肽。从疏/亲水性分布曲线可看出,该肽链形成的分子具有很大范围的疏水面。按Garnier二维结构预测法显示成熟蛋白的肽链主要以β-折叠肽链的形式存在,推测可能形成一种有利于脂质传送的开放性管形构造。Southern杂交分析表明,LTP基因在水稻基因组中以基因家族的形式存在。