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以猪血清为材料,通过磷酸乙醇胺—琼脂糖亲和层析,Sepharose 4B柱层析和Sephacryl—S300凝胶过滤,获得了猪C—反应蛋白的结晶。猪C—反应蛋白可与肺炎球菌壁C多糖发生特异的沉淀反应,这种结合是依赖钙离子的。EDTA和一些磷脂代谢产物如磷酸胆碱,磷酸乙醇胺等,能抑制猪C—反应蛋白与C多糖的结合。在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳及梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳中,猪C—反应蛋白表现出与人C—反应蛋白相同的行为,亚基是一条分子量为23.5kD的肽链,全分子的表观分子量为150kD。猪C—反应蛋白与兔抗人C—反应的蛋白的抗血清能发生免疫交叉反应。 相似文献
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用 PCR方法构建了一个不能形成二聚体的 C端缺失半胱氨酸 57的 h ITF突变体 .将其克隆到大肠杆菌表达载体 p GEX- 4T- 1中 ,ITPG诱导表达 ,融合蛋白经 Glutathione- Sepharose 4B亲和层析 ,凝血酶酶切和 Sephacryl S 1 0 0纯化 ,得到突变体蛋白 .SDS- PAGE,氨基酸组成 ,飞行质谱 ,N端氨基酸序列测定结果与期望值一致 .研究表明突变体的生物学活性有所降低 .对胃蛋白酶作用的稳定性降低 . 相似文献
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兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型:ZnMT-Ⅰ和ZnMT-Ⅱ.在酸性条件下脱金属,经Sephadex G-25柱层析得到脱金属硫蛋白(apoMTs).用圆二色性(CD)光谱法研究,发现两种亚型apoMTs 与Pb2+ 的结合依赖于Pb2+ 的加入比例及pH 值.apoMT-Ⅰ在pH3~5之间,apoMT-Ⅱ在pH4~6之间与Pb2+ 结合形成特征簇合物Pb7MTs,其CD谱图特征峰位于316nm (- ),270 nm (+ ),245 nm (+ )及225 nm (- ),提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境.不同亚型apoMTs 与Pb2+ 的结合方式各不相同:Pb2+ 与apoMT-Ⅰ的结合采取平均分配的方式,而与apoMT-Ⅱ则为选择性结合方式,表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异. 相似文献
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利用竞争型ELISA法鉴定硒诱导的金属硫蛋白 总被引:4,自引:0,他引:4
利用竞争型ELISA法鉴定硒诱导的金属硫蛋白 (MT) ,发现对照组小鼠肝脏MT含量为 (2 .47± 0 .90 )μg/g湿重组织 ,硫酸锌组小鼠肝脏MT含量为 (8.15± 2 .2 0 ) μg/ g湿重组织 ,硒麦芽组小鼠肝脏MT含量为(12 .80± 1.44 ) μg/ g湿重组织。锌组和硒组的MT含量与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。硒组MT含量要显著高于锌组的MT含量 (P <0 .0 5 )。 相似文献
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dUTP焦磷酸酶研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
dUTPase通过催化水解dUTP,降低尿嘧啶在DNA中的错误掺入,调节dUTP/dTTP的正常比例,保证了DNA复制的正确性和顺利进行。绝大多数dUTPase结构相似,活性中心由不同的亚基共同参与。dUTPase的活性已确定存在于真核及原核的多种组织中,其在细胞内的表达依赖细胞周期或细胞发育的调控。许多病毒也编码dUTPase,且与病毒的感染力有关。研究显示该酶的表达对由胸苷酸合成酶(TS)抑制剂产生的细胞毒性具有关键的拮抗作用,为dUTPase拮抗剂在癌症化疗和逆转录病毒治疗中的开发应用奠定了理论基础。 相似文献
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转金属硫蛋白及其突变体αα
基因烟草的Tl代性状分析 总被引:4,自引:0,他引:4
转金属硫蛋白MT及其突变体αα的烟草自交得到T1代,转基因植株的重金属抗性和除草剂抗性在后代中得到保持.不同的转基因株系在含有除草剂的培养基中萌发时表现出不同的抗性分离比,说明外源基因在植物染色体内可能有不同的整合拷贝数.两种转基因烟草在含有不同浓度Cd的培养基中萌发时表现出高的重金属抗性,其中转αα基因烟草对Cd的抗性优势在T1代种子萌发实验中更加明显.以MTcDNA为探针进行Southernblot杂交,在T0代和T1代同时检测到两种转基因烟草外源基因的存在,证明外源基因确实整合到烟草基因组内并稳定传递到后代.Westemblot结果证明了外源基因在烟草第二代的表达.纯合株系仍需要进一步的筛选. 相似文献
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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定 总被引:2,自引:0,他引:2
以新鲜蚯蚓为原料,经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步聚,得到一种纯度达95%以上的蚯蚓纤溶酶.该酶具有强烈的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性,平板法测得其比活性为90OUK单位/毫克蛋白,TAME法测得其比活性为2500O单位/毫克蛋白.酶学性质研究表明其最适反应温度为65℃,最适反应PH值为8.5.该酶的分子量为33kD,等电点为pH3.5.还对该酶进行了氨基酸组成分析,并测定了其N端部分序列. 相似文献
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生物工程技术在工业、农业和环境保护上的应用日益广泛,将工程微生物应用于环境污染的治理,是一条快速、安全又经济的途径。本文报道了获得一种清除重金属污染工程藻的研究。将小鼠金属硫蛋白-I(mousemetallothionein-I,mMT-I)cDNA基因片段插入到质粒pRL439上的强启动子PpsbA之后,并与穿梭载体pDC-8相连构建成功大肠杆菌──蓝藻穿梭表达载体pDC-MT,然后通过三亲结合转移法将pDC-MT转入固氮丝状体蓝藻鱼腥藻(Anabaena)7120中,经新霉素筛选获遗传稳定的转外源DNA藻株;纯化单藻落扩大培养后,提取蓝藻质粒,斑点杂交确定mMT-IcDNA的转人;在培养基中加入重金属Cd,培养后收集藻细胞,用WesternBlotting,极谱法和原子吸收等多种方法确定金属硫蛋白的表达,并计算表达量约为40μgMT/g藻鲜重。 相似文献
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